MIO medium grunnlag, forberedelse og bruk



den halv MIO er en biokjemisk test som brukes til å identifisere arter av bakterier som tilhører familien Enterobacteriaceae. Det er ganske næringsrik og består av glukose, gjærekstrakt, pepton, triptein, L-ornitinhydroklorid, bromokresolpurpur og agar.

Betydningen av dets akronym (MIO) beskriver hver av parametrene som kan observeres i dette mediumet; motilitet, indol og ornitin. Motilitet er mikroorganismens evne til å bevege seg ved tilstedeværelsen av flagella. For at denne egenskapen skal observeres, må konsistensen av mediet være halvfast, slik at preparatet har mindre mengde agar..

Indolproduksjonen viser tilstedeværelsen av tryptofanaseenzymet som virker på aminosyretryptofan, idet det er nødvendig å bruke et avslørende reagens for å gjøre indolproduksjonen synlig.

Endelig bestemmer ornitin om bakterien er i stand til å dekarboksylere aminosyren, det vil si hvis den har enzymet orinithin-dekarboksylase.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Pepton, gjærekstrakt og triptein
    • 1.2 Motilitet
    • 1,3 Glukose
    • 1,4 L-ornitin
    • 1,5 pH-indikator
  • 2 Frø og utviklingsteknikk
  • 3 Fremstilling
    • 3,1 MIO Medium
    • 3.2 Kovacs reagens (Indol test utvikler)
  • 4 Bruk
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 Referanser

fundament

Pepton, gjærekstrakt og triptein

Disse elementene bidrar til næringsegenskapen til dette mediet. De tjener som en kilde til næringsstoffer og essensielle aminosyrer for bakteriell utvikling.

I tillegg er triptein en kilde til tryptofan for å bevise tilstedeværelsen av enzymet tryptofanase, som nedbryter tryptofan ved en reduktiv deaminasjonsfrigivende indol, pyruvsyre, ammoniakk og energi.

Indol er fargeløs, så dens nærvær avsløres ved å legge til fem dråper Ehrlich eller Kovacs reagens, begge med p-dimetylaminobenzaldehyd.

Aldehydgruppen av denne forbindelsen reagerer med indol, genererer et ringformet fuchsia-rødt produkt på agaroverflaten.

Eventuelle spor av farge bør betraktes som positive bevis. Testen skal leses umiddelbart, fordi etter en stund nedbrytes fargen.

På den annen side skal denne testen avsløres etter å ha registrert resultatene av motilitet og dekarboksylering av ornitin..

tolkning

Positiv test: dannelse av en fuchsia rød ring når man legger til Kovacs reagensdråper.

Negativ test: det er ingen ringformasjon.

motilitet

Evnen til bakteriene til å bevege seg vil bli påvist dersom et uklart medium observeres eller hvis det er en tykk vekstlinje som utvides rundt den første inokulasjonen.

En negativ motilitetstest vil bli påvist ved å observere en tynn vekstlinje, og rundt omkring vil være uten vekst.

Det er viktig at motiliteten blir lest før avslørende indol, siden tilsetningen av reagensen skyver hele mediet.

I mobile, men sakte voksende bakterier er det vanskelig å demonstrere deres motilitet med dette mediet. I dette tilfellet anbefales det å bruke andre tester eller metoder, for eksempel motilitetsmediet eller drop drop-metoden.

glukose

Glukose er det gjærbare karbohydratet som i tillegg til å tilveiebringe energi syrer mediet, en nødvendig betingelse for dekarboksylering av aminosyrenorithinet å forekomme.

Gisingen av glukose bør alltid forekomme, basert på prinsippet om at alle bakterier som tilhører familien Enterobacteriaceae fermentert glukose.

L-Ornithine

Hvis bakterien produserer enzymet ornitindecarboxylase, kan det virke når mediet er blitt surgjort ved fermentering av glukose.

Enzymornitindecarboxylasen virker på karboksylgruppen i aminosyren som produserer en amin som kalles putresin som alkaliserer mediet igjen.

Denne testen bør leses etter 24 timers inkubasjon, fordi hvis du prøver å lese før du kan feiltolke testen med en falsk negativ.

Det må huskes at den første reaksjonen som skjer, er fermentering av glukose, slik at mediet blir gul i en innledende fase (første 10 til 12 timer). Hvis dekarboksyleringen av ornitin senere oppstår, vil mediet bli lilla.

Det er viktig å tolke ornitin-dekarboksyleringstesten før avslørende indol, siden tilsetningen av Kovacs reagens modifiserer fargene til mediet.

tolkning

Negativ test: middels gul eller med gul bakgrunn.

Positiv test: helt lilla.

PH indikator

I dette tilfellet brukes bromokresol lilla; Den som har ansvar for avsløring når det er en pH-endring i midten. Når surgjort, blir indikatoren gul, og når alkalisert blir lilla.

Frø og utviklingsteknikk

For å plante MIO-mediumet, brukes en rett sløyfe eller en nål, og med det samles en del av kolonien som skal studeres..

En dyp punktering gjøres i MIO-mediet i en rett linje. Det er ikke tilrådelig å utføre dobbelt punktering, da det kan gi et falskt motilitetsbilde hvis punkteringene ikke utføres på samme sted.

Inkuber i 24 til 48 timer ved 37 ° C i aerobiosis. Vær oppmerksom på resultatene i denne rekkefølgen: motilitet, dekarboksylering av ornitin og endelig avsløre indolen.

Det er tilrådelig å fjerne aseptisk 2 ml medium, transponere det til et sterilt rør og utføre det indolet test, slik at hvis den gir negativ kan inkuber resten av det opprinnelige rør i 24 timer, igjen for å avsløre indol.

Utviklingen av indol utføres på følgende måte: 3 til 5 dråper av Kovacs-reagenset blir tilsatt til MIO-mediumet og omrørt kraftig. Det observeres om en rød ringen på fuchsia vises eller ikke.

forberedelse

Halv MIO

Veie 31 g av MIO-mediumet og oppløs i 1 liter destillert vann.

Varm til blandingen koker i ett minutt, omrør ofte til agar er fullstendig oppløst. Fordel 4 ml mediet i 13/100 reagensrør med bomullsdeksel.

Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la den stå rett i et stativ på en slik måte at en halvfast blokk dannes.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. Tillat å temperere før planting av bakteriestammen.

Fargen på det dehydrerte mediet er beige og det av mediet tilberedt litt lilla opaliserende.

Den endelige pH av det fremstilte medium er 6,5 ± 0,2

Mediet blir gul med sur pH og er lilla ved alkalisk pH.

Kovacs reagens (indol test utvikler)

Dette reagenset fremstilles som følger:

150 ml amyl-, isoamyl- eller butylalkohol (hvilken som helst av de tre) måles. I det oppløses 10 g p-dimetylaminobenzaldehyd. Deretter tilsettes 50 ml konsentrert saltsyre langsomt.

Det fremstilte reagenset er fargeløst eller lysegult. Det skal oppbevares i en gult flaske og holdes i kjøleskap. En mørk brun farge viser forverringen.

Også Kovacs-reagenset kan erstattes av Ehrlich-reagenset. Sistnevnte, som er mer sensitiv, foretrekker å avsløre indol i bakterier som produserer det i små mengder, som i noen Gram-negative ikke-fermenterende baciller og visse anaerober.

bruk

Dette mediet er en test som utfyller et batteri av biokjemiske tester for identifisering av bakterier som tilhører familien Enterobacteriaceae.

De-karboksyleringsdataene for ornitin tjener til å differensiere Shigella sonnei, Det gir positivt, av Shigella boydii, Shigella flexneri og S. dysenterieae, som gir negativer.

Det skiller også slekten Klebsiella, som gir negativ, slekten Enterobacter, der de fleste av artene er positive.

Kvalitetskontroll

Hver gang en serie MIO-medium er fremstilt, kan en kontrolltest utføres. For dette brukes kjente eller sertifiserte stammer til å observere mediumets oppførsel.

Stammen som kan brukes er Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes og Proteus mirabilis.

De forventede resultatene er E. coli og M. morganii. Dan M: +, I: + og O: +.

Klebsiella pneumoniae gir alle negative (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis og Enterobacter aerogenes dan M: + I: - og O: +.

referanser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorier Britania. MIO Medio 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Tilgjengelig på: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motilitet, Indol, Ornitin. 2010. Tilgjengelig på: andinamedica.com