Halv SIM-grunnlag, forberedelse og bruk
den halv SIM Det er en halvfast og differensiell agar, spesielt utviklet for å hjelpe til med å identifisere noen bakterier, hovedsakelig av familien Enterobacteriaceae. Den består av triptein, pepton, jernsulfat, ammoniumsulfat, natriumtiosulfat og agar.
Dette mediet tillater utførelse av tre viktige tester: produksjon av hydrogensulfid (H2S), indoldannelse og motilitet, dermed akronym SIM. På grunn av sin gode nytte kan den ikke mangle i et bakteriologilaboratorium.
I motsetning til andre medier må dette være halvfast slik at bevegelseskapasiteten til enkelte bakterier kan påvises. I denne forstand fungerer denne testen veldig bra for Enterobacteriaceae, men ikke i gramnegative, ikke-fermenterende baciller, hvor det er foretrukket å bruke andre metoder, for eksempel den ventende dråpen.
SIM-mediumet gjør det mulig å skille mellom bestemte egenskaper som karakteriserer enkelte bakterier i forhold til andre. For eksempel Escherichia coli det utmerker seg ved å være H2S (-), Indol (+) og motilitet (+), mens Proteus mirabilis det er H2S (+), indol (-), motilitet (+).
index
- 1 Foundation
- 1.1 Strømkilde
- 1.2 Produksjon av hydrogensulfid
- 1.3 Indol formasjon
- 1.4 Motilitet
- 2 Fremstilling
- 2.1 Half SIM
- 2.2 Kovacs reagens
- 2.3 Erlich-reagens
- 3 bruksområder
- 3.1 Frø
- 4 Kvalitetskontroll
- 5 begrensninger
- 6 Referanser
fundament
Det er et kulturmedium som betraktes som differensial, fordi dets bruk klarer å skille mellom mikroorganismer som er i stand til å produsere hydrogensulfid fra de som ikke gjør det; fremhever også de som danner indol fra tryptofan av de som ikke danner det, og endrer seg til slutt motile fra de immobile bakterier.
Strømkilde
Som ethvert kulturmedium har det elementer som gir de nødvendige næringsstoffene slik at ikke-krevende mikroorganismer kan utvikle seg. Disse elementene er representert av peptonene og tripteínaen.
Utviklingen av mikroorganismen i miljøet er viktig for å kunne observere tilstedeværelsen eller fraværet av egenskapene evaluert av dette medium.
Produksjon av hydrogensulfid
Brevet S av akronym SIM refererer til produksjon av hydrogensulfid (H2S). Bakterier som er i stand til å danne hydrogensulfid, vil ta svovel av natriumtiosulfat.
Når H er dannet2S - fargeløse gasser - dette reagerer med jernsaltet som er til stede i mediet, og danner jernholdig sulfid, tydelig synlig (svart bunnfall). Bakterier som ikke danner H2S, la midten av den opprinnelige fargen (beige).
Tilstedeværelsen av det svarte bunnfallet kan hindre tolkningen av motilitet. Imidlertid er det kjent at flertallet av H-produserende enterobakterier2S er positiv motilitet, som Salmonella, Proteus og Citrobacter. I tillegg er det svarte bunnfallet som dekker nesten hele mediet, noe som tyder på positiv motilitet.
Indole trening
Det andre bokstavet i akronymet SIM er "I", som representerer dannelsen av indol.
I denne forstand oppfyller tripteína, i tillegg til å være en kilde til næringsstoffer, en annen grunnleggende funksjon. Denne peptonen er rik på en aminosyre som kalles tryptofan, derfor kan den vise bakteriene som produserer tryptofanase.
Dette enzymet er ansvarlig for klipping av aminosyretryptofan, med den resulterende dannelsen av indol (fargeløs substans), pyrodruesyre og ammonium..
Det er derfor, for å demonstrere denne reaksjonen, det er nødvendig å legge til en avslørende substans (Ehrlich-reagens eller Kovac-reagens). Enten reagerer med indol, som danner en ringformet rødfuksi-substans på overflaten av agar. Hvis fuchsia-ringen vises, indoleres testen som positiv.
Bakterier som ikke har dette enzymet, vil ikke danne ringen og tolkes som en negativ indol-test.
Det er viktig å påpeke at indolprøven skal være den siste som skal tolkes, siden når reagensen er tilsatt, blir mediet overskyet, noe som gjør det vanskelig å visualisere motiliteten.
motilitet
Endelig betyr bokstaven "M" av ordet SIM motilitet. For å kunne vurdere motiliteten er dette mediet strategisk halvfast, fordi denne egenskapen er viktig for å kunne observere om det er bakteriell bevegelse eller ikke. Bakteriene som har flagella er de som gir denne positive testen.
En positiv test vil bli tydelig når turbiditet observeres, både i det første inokulumet og rundt det. Mens ikke-mobile bakterier utvikler seg bare i den første inokulasjonsbanen.
forberedelse
Halv SIM
Veie 30 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen får stå i 5 minutter og oppvarmes deretter til koking, omrøres ofte til den er helt oppløst..
Fordel blandingen i reagensrør med bomullsdeksel og autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern rørstativet fra autoklaven og la det størkne i oppreist stilling, slik at mediet er i form av en blokk..
For oppbevaring holdes den i kjøleskapet til den brukes. Det fremstilte mediet må ha en endelig pH på 7,3 ± 0,2.
I øyeblikket for å inokulere mediet, må det være ved romtemperatur. Fargene på mediet er beige.
Kovacs reagens
Mål 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Bruk en av de tre nevnte).
Oppløs 10 g p-dimetylaminobenzaldehyd. Deretter tilsetter du langsomt 50 ml konsentrert saltsyre.
Reagenset klar til bruk er fargeløst eller lysegult. Den skal oppbevares i en rav flaske og oppbevares i kjøleskap. Ikke bruk hvis det tar en mørk brun farge; som indikerer at den er skadet. Dette reagenset er foretrukket ved behandling med enterobakterier.
Erlich-reagens
Veier 2 g p-dimetylaminobenzaldehyd og oppløses i 190 ml absolutt etylalkohol og blandes sakte med 40 ml konsentrert saltsyre. Hold Kovacs reagens på samme måte. Ehrlich reagens brukes mer for ikke-fermenterende og anaerobe bakterier.
søknader
SIM-mediumet er sterkt brukt i bakteriologilaboratorier. Det har som en fordel at i samme rør kan tre viktige egenskaper observeres ved identifisering av Enterobacteriaceae.
plantet
Den riktige måten å så dette mediet på er å bruke nålen, med hvilken en del av den rene kolonien som skal studeres, tas og settes inn i midten av mediet vertikalt. En enkelt trykk må gjøres. Punktet skal ikke nå bunnen av røret, den riktige tingen er å dekke bare to tredjedeler av dybden.
Det er ikke tilrådelig å gjenta inokulumet, da dette kan føre til falske tolkninger av positiv motilitet. Det inokulerte medium inkuberes i aerobiose ved 37 ° C i 24 timer.
Avsluttet tidspunktet det ble observert hvis det var eller ikke var produksjon av H2S og motilitet er lest. Endelig avsløres indolen, og tilsetter 3 til 4 dråper av Ehrlich eller Kovacs reagens, det blandes forsiktig og tolkes.
Kvalitetskontroll
Som en sterilitetskontroll inkuberes ett eller to rør innvendig uten inokulering i en ovn ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes at etter denne tiden vil det ikke være vekst eller endring av farge.
Som kvalitetskontroll kan sertifiserte kjente stammer brukes, for eksempel: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.
De forventede resultatene er: Escherichia coli H2S negativ, indol og positiv motilitet, Enterobacter aerogenes bare positiv motilitet, Salmonella typhimurium H2S og positiv motilitet, med negativ indol. Proteus vulgaris alle positive, mens Klebsiella pneumoniae og Shigella sonnei alle negative.
begrensninger
-Noen stammer av Morganella morganii, blant andre stammer kan produsere et brunt pigment i dette mediet på grunn av produksjon av melanin, bør dette ikke forveksles med utfellingen av jernsulfid. I uerfarne fagfolk kan denne situasjonen generere falske positiver i tolkningen av H-testen2S.
-Strenge aerobic bakterier vil bare vokse på overflaten av røret, noe som gjør det vanskelig å tolke motilitet.
referanser
- BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Tilgjengelig på: bd.com
- Neogen Laboratories SIM-medium. Tilgjengelig på: foodafety
- Difco Francisco Soria Melguizo. SIM-medium. 2009. Tilgjengelig på: http://f-soria.es
- Brizuela-Lab Laboratory SIM-medium. Tilgjengelig på: .brizuela-lab.com
- Laboratorier Britania. SIM-medium. 2015. Tilgjengelig på: studyres.es/doc
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.