Utarbeidelse av kulturmedier hva det består av, mål og trinn



den utarbeidelse av kulturmedier Det er en rutinemetode som brukes i laboratorier for vekst av ønskede mikroorganismer. Kulturmediene er faste, flytende eller halvfaste preparater som har alle næringsstoffene som er nødvendige for utviklingen av en mikrobiell populasjon.

Generelt sett er midlene for å dyrke mikroorganismer rike på proteiner og aminosyrer og inneholder vanligvis noen komponent som favoriserer veksten av organismen du vil studere, for eksempel vitaminer, blod, serum, blant andre..

Det er ingen generell eller universell kulturmedium, siden sammensetningen varierer etter behovene til mikroorganismen av interesse. Noen bakterier kan utvikles i ethvert kulturmedium, men andre har spesielle krav.

index

  • 1 Hva består det av??
    • 1,1 agar
    • 1.2 Væsker
    • 1.3 Ekstrakter
    • 1.4 Peptoner
    • 1,5 Støtdemper
  • 2 mål
  • 3 Typer media
    • 3.1 Basert på sammensetningen
    • 3.2 Basert på typen av mikroorganisme
  • 4 trinn
  • 5 referanser

Hva består det av??

Mikroorganismer, som sopp og bakterier, kan ikke studeres individuelt på grunn av deres lille størrelse. Derfor må de dyrkes på kunstige måter som tillater en betydelig økning i befolkningen.

For eksempel, hvis vi ønsker å studere bakterier, må vi gi dem de rette forholdene slik at de kan sprede seg og danne en koloni (som kan observeres med det blotte øye).

Utarbeidelsen av kulturmediet varierer mye, avhengig av typen mikroorganisme som man ønsker å dyrke. Før du klargjør det, er det nødvendig å kjenne de grunnleggende ernæringsbehovene til arbeidets kropp.

Deretter beskrives de vanligste komponentene i kulturmedia for å ha en generell ide om deres forberedelse:

agar

Den brukes i avlinger som geleringsmiddel og legges til når man ser etter et fast eller halvfast medium. Det første solidifiseringsmiddel som ble anvendt ved fremstilling av media var gelatin, men i år 1883 ble agar introdusert i bakteriologiens verden av W. Hesse.

Bakteriologisk agar har som hovedkomponent et polysakkarid av komplekse grener ekstrahert fra alger. Denne forbindelsen brukes som et fortykningsmiddel for vanlige matvarer som is og syltetøy.

Det er en svært verdifull del i mikrobiologi av flere grunner. Hovedsakelig fordi mikroorganismer ikke kan nedbryte den, fortløper ved en temperatur på 100 ° C og forblir i flytende tilstand til de når 45 ° C eller mindre.

Hvis du vil forberede et fast medium, bør agarkonsentrasjonen være rundt 1,5%, mens halvfaststoffer skal fremstilles fra 0,3 til 0,5%.

væsker

Kultiveringen av patogene organismer krever kroppsvæsker slik at de kan utvikle seg som de ville i sitt naturlige miljø. Av denne grunn blir hele eller defibrillert blod tilsatt. Fluidet ekstraheres fra et sunt dyr og, når det er sterilisert, blir det tilsatt til dyrkningsmediet.

utdrag

De er hentet fra forskjellige dyredeler (som kjøtt eller lever) eller grønnsaker (frø) og behandlet for å oppnå et fast konsentrat i form av pasta eller pulver. De vanligste er gjær, malt og kjøtt.

Peptonas

Disse organiske forbindelser oppnås ved enzymatisk eller kjemisk hydrolyse av animalske eller vegetabilske vev. Hensikten er å legge til innhold som er rik på aminosyrer, som er de grunnleggende enhetene av proteiner.

Støtdempere

Buffere eller buffersystemer unngår plutselige endringer i pH og bidrar til å opprettholde det optimale området som kroppen tolererer.

De fleste organismer kan utvikle seg riktig til en pH på 7, selv om enkelte bakterier foretrekker alkaliske medier. Det er imidlertid bakterier som motstår pH-variasjoner mellom verdiene 6 og 9.

I arter som er følsomme overfor pH, blir ikke skaden produsert av den store mengden av hydrogen eller hydroksylioner, men ved økning av svake syrer eller baser som kan trenge inn i cellen.

Også indikatorer for at pH for å overvåke det og unngå avvik forårsaket av gjæring eller andre prosesser blir tilsatt.

målsettinger

Hovedmålet ved utarbeidelse av et kulturmedium er å legge til alle nødvendige komponenter for å tillate en vellykket utvikling av organismen som ønsker å bli isolert. Den mest effektive kombinasjonen av komponenter og næringsstoffer må identifiseres for å oppnå ønsket medium.

Både forberedelse og lagring av mediet er kritisk for å sikre vellykket vekst, siden disse trinnene er avhengige av sammensetningen av miljøet og tilgjengeligheten av næringsstoffer.

Det må tas hensyn til at dyrking av mikroorganismer er en oppgave som påvirkes av flere faktorer som er utenfor kulturmediet, slik som intensiteten av det mottatte lyset, temperaturen og nivået av surhet eller alkalitet i mediet. Derfor må hver av disse variablene tas i betraktning.

Typer media

Basert på sammensetningen

Basert på sammensetningen er det tre hovedtyper av avlinger: naturlige eller empiriske, semisyntetiske og definerte syntetiske eller kjemiske midler.

Naturmiljø

I naturlige miljøer er den eksakte sammensetningen ukjent. Disse inkluderer ingredienser som melk, fortynnet blod, grønnsaksjuice, ekstrakter og infusjoner av kjøtt og peptoner. Av økonomiske grunner blir lavkostkomponenter ofte tilsatt som soyekstrakt, mys, melasse etc..

Semisyntetiske medier

Det kalles halvsyntetisk medium hvis sammensetningen av den er delvis kjent. Ethvert medium som inneholder agar blir et halvsyntetisk medium.

Blant dem har vi papa dextrose agar, czapek-dox agar, havre agar, pepton kjøtt agar, blant andre eksempler.

Syntetisk eller kjemisk definert medium

I dette tilfellet er sammensetningen av mediet - i form av mengden karbon, nitrogen, svovel, fosfor og andre vekstfaktorkilder - fullt kjent. Det er veldig nyttig hvis du ønsker å få reproduksjonsbare resultater for andre forskere.

For de såkalte "mikroorganismer med spesielle vekstkrav" er det nødvendig å legge til de nødvendige komponentene. Et eksempel på denne typen er Lactobacillus.

Basert på typen av mikroorganisme

Tilsvarende er det en annen klassifisering for kulturmedier basert på hvilken type mikroorganisme som kan vokse i den. Etter dette prinsippet har vi følgende generelle virkemidler, selektiv og differensial. Hver er beskrevet nedenfor:

Generelt betyr

Disse innrømmer utviklingen av et bredt spekter av mikroorganismer. Hvis noen organisme trenger spesielle forhold for veksten, vil den ikke kunne utvikle seg vellykket i denne typen avlinger.

Berikelse betyr

Anrikningsmiddelet favoriserer veksten av en bestemt type mikroorganisme, men ingen substans er blitt tilsatt for å forhindre at andre mikrober vokser i den..

Selektive medier

De ser etter den spesifikke veksten av en mikroorganisme, kaller det sopp, bakterier, protozoer, blant andre. For å gjøre dette hemmer de utviklingen av andre.

For å oppnå dette målet kan man legge til dødelige kjemiske forbindelser for en stor gruppe mikroorganismer og ufarlig for organismen av interesse eller legge til energikilder som bare kan assimileres av mikrobeen som søktes.

Selektive medier brukes når du tar medisinske prøver for å vokse en patogen mikroorganisme. Her er det nødvendig å favorisere veksten av patogenet og hemme utviklingen av den normale mikrobielle flora fra pasienten.

Bismutsulfittagar, for eksempel, tillater ikke veksten av gram-positive bakterier og et stort antall bakterier som finnes i mage-tarmhulen. Derfor er det vant til å dyrke de gramnegative bakteriene som forårsaker tyfusfeber, Salmonella typhi i fekale prøver.

Differensialmedier

Denne typen bruker noen diagnostisk funksjon av organismen av interesse (særegenheter i stoffskiftet, for eksempel) for å kunne identifisere dem mot en annen art som vokser i samme miljø.

Både differensialmediene og det selektive mediet er svært nyttige innen klinisk mikrobiologi og folkehelse, da disse disiplene må oppdage nærvær av spesifikke mikroorganismer relatert til dårlige hygieniske forhold eller forhold..

Indikatorstoffer kan legges til avlingen som gir en karakteristisk egenskap for den ønskede koloni. For eksempel blir agar-eosin-metylenblått (forkortet EMB) og MacConkey-agar tilsatt laktose og en pH-indikator.

Når en koloni er utviklet i disse mediene med evnen til å fermentere laktose og produsere aldehyder, kan de derfor observeres i en spesiell farge.

trinn

For tiden kan kulturmediene kjøpes i lyofilisert form. Derfor tilrettelegges preparatet og bare produktet blir rehydrert. Innholdet må veies (med tanke på sluttmengden du vil forberede) og oppløses i destillert vann etter alle indikasjoner på produktet.

Innholdet i væskemediet må deles inn i de ønskede beholdere (petriskål, rør, etc.) for etterfølgende sterilisering. For å fordele det faste mediumet er det nødvendig å smelte det med en mikrobølgeovn eller ved å underkaste materialet til et vannbad. Mediumets pH må justeres.

Vanligvis brukes agar i reagensrør eller i petriskål. Hvis agar størkner i en skrånende stilling, med riktig vinkel slik at den endelige terminalkanten er diagonal, er dette arrangement kjent som fløyt-topp eller skråstilt rør. Når agar størkner i fullstendig vertikal stilling, kalles den "dyp".

Etter sterilisering av mediet - ved hjelp av en autoklav - får de avkjøles. Disse må håndteres i et miljø som er fri for mikroorganismer, det vanligste er å arbeide med en opplyst lighter som sikrer et aseptisk miljø i nærheten.

referanser

  1. Celis, J. E. (2006). Cellbiologi: en laboratoriehåndbok (Vol. 2). Elsevier.
  2. Finegold, S. M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S. M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: mikrobiologisk diagnose. Pan American Medical.
  3. Olivas, E. (2004). Håndbok for mikrobiologi I og II og Parasitologi. Autonome universitetet i Ciudad Juárez.
  4. Schlegel, H. G., og Zaborosch, C. (1993). Generell mikrobiologi. Cambridge University Press.
  5. Tortora, G.J., Funke, B.R., og Case, C.L. (2007). Introduksjon til mikrobiologi. Ed. Panamericana Medical.