Baird Parker Agar grunnlag, forberedelse og bruk

den Baird Parker agar Det er et solidt, selektivt og differensielt kulturmedium. Det ble opprettet i 1962 for deteksjon og koagulase positiv Staphylococcus telling (Staphylococcus aureus).

Det består av pankreatisk kaseinhydrolysat, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, litiumklorid, glycin, natriumpyruvat, kaliumtelluritt, agar og eggeplomme emulsjon.

Baird Parker agar er basert på evnen til S. aureus å redusere telluritt og produsere lecitinase. Begge egenskapene genererer en koloni med spesifikke egenskaper for denne arten. Derfor gir den stor effektivitet i deteksjonen av denne mikroorganismen.

De typiske koloniene av S. aureus De er svart eller mørkegrå, med en fargeløs grense og en klar halo som omgir dem, som skiller seg fra resten av mikroorganismer. Dette patogenet finnes i kliniske prøver, vann, kosmetikk og rå eller tilberedt mat.

Diagnose eller deteksjon er viktig, på grunn av forskjellige patologier som produseres som matforgiftning, skåldet hud syndromet, toksisk sjokksyndrom, abscesser, meningitt, sepsis, endokarditt, blant annet.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Ernæringsmessig kraft
  • 1.2 Selektiv
  • 1.3 Differensial
• 2 Fremstilling
  • 2.1 Eggeplommeemulsjon
  • 2,2 kalium telluritt ved 1% vekt / volum
  • 2.3 Fremstilling av kulturmediet
• 3 Bruk
  • 3.1 Kliniske prøver
  • 3.2 Matprøver
  • 3.3 Vannprøver
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 anbefalinger
• 6 Referanser

fundament

Næringsrik kraft

Pankreatisk kaseinhydrolysat, kjøttekstrakt og gjærekstrakt er kilder til næringsstoffer, vitaminer og mineraler som er nødvendig for total mikrobiell vekst, mens pyruvat og glycin er forbindelser som fremmer spesifikk vekst Staphylococcus aureus.

selektiv

Baird Parker agar er selektiv fordi den inneholder stoffer som hemmer veksten av den medfølgende floraen, samtidig som det fremmer utviklingen av S. aureus. De inhibitoriske forbindelsene er litiumklorid og kaliumtelluritt.

differensial

Dette betyr at du kan skille mellom S. aureus av resten av koagulase-negative Staphylococci. S. aureus har evnen til å redusere telluritt til svart metallfritt tellurium som danner svarte eller mørkegrå kolonier.

På samme måte gir eggeplommen substratene for å bevise tilstedeværelsen av enzymet lecitinase og lipase. S. aureus det er positiv lecitinase, og derfor vil en klar halo bli observert rundt kolonien, noe som indikerer at lecitinet ble hydrolysert.

I denne forstand viser utseendet i denne agar av svarte eller mørkegrå kolonier som er lyse med lys halo rundt, tilstedeværelse av S. aureus. 

Hvis en utfellingssone dannes, er det indikativ at det er lipaseaktivitet. Noen stammer av S. aureus de er positive lipase og andre negative.

I tilfelle at S. aureus Hvis lipasen er positiv, observeres en ugjennomsiktig sone rundt den svarte eller mørkegrå koloni, og deretter den klare haloen på grunn av virkningen av lecitinase..

Kolonier av andre bakterier enn S. aureus kunne vokse i dette mediet, vil utvikle fargeløse eller brune kolonier, uten halo rundt.

Atypiske svarte kolonier kan også observeres med eller uten en fargeløs grense, men uten en klar halo. Disse koloniene bør ikke tas i betraktning, de stemmer ikke overens med S. aureus.

forberedelse

Eggeplomme emulsjon

Ta et friskt kyllingegg, vask det godt og legg det 2 til 3 timer i 70% alkohol. Da åpner egget aseptisk og egghvite er forsiktig atskilt fra eggeplommen. Etterpå tas 50 ml av eggeplommen og blandes med 50 ml steril fysiologisk oppløsning.

Kalium telluritt ved 1% vekt / volum

Noen kommersielle hus selger 1% kalium telluritt klar til bruk. Den blir tilsatt til mediet før mediet størkner.

For å forberede denne løsningen i laboratoriet veier 1,0 g kalium telluritt og oppløses i en del av vann. Deretter blir mengden vann fullført til 100 ml. Løsningen må steriliseres ved filtreringsmetoden.

Fremstilling av kulturmedium

Veid 60 g av dehydratiserte medium og oppløs i 940 ml destillert vann. La blandingen stå i ro i ca. 5 til 10 minutter.

Påfør varme ved å røre mediet ofte for å forbedre oppløsningen. La det koka i et minutt. Steriliser i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

La stå til den når en temperatur på 45 ° C og tilsett 50 ml av eggeplommeemulsjonen og 10 ml 1% telluritt. Bland godt og server 15-20 ml på sterile petriskål.

Tillat å størkne, bestille invertert i plaquers og lagre i kjøleskap til bruk.

Den endelige pH-verdien av det fremstilte medium bør være 6,8 ± 0,2.

Før du planter en prøve, vent til platen tar omgivelsestemperaturen. Så platene ved strikking eller ved å så på overflaten med Drigalski spatel.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys brun og fargen på det fremstilte medium er lys rav.

bruk

Kliniske prøver

Kliniske prøver blir podet direkte ved å tømme deler av materialet i den ene enden av platen, og derfra strikker den ut ved utmattelse. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Matprøver

Veid 10 g av matprøven og homogeniser i 90 ml 0,1% peptonert vann, fortynninger fremstilles derfra, om nødvendig. Inokuler platene i triplikat med 0,3 ml av de fremstilte løsningene, og så på overflaten med en Drigalski-spatel. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Denne metoden tillater å telle de typiske kolonier som er oppnådd og er ideell når tilstedeværelsen av S. aureus over 10 CFU per g / ml prøve.

Hvis du mistenker at mengden av S. aureus det er lite eller det er mye medfølgende flora, anbefales det å berike prøven i tripticase soy bouillon med 10% NaCl og 1% natriumpyruvat. Dette vil favorisere veksten av S. aureus og vil hemme utviklingen av den medfølgende floraen. Rør som er overskyet vil bli sådd på Baird Parker agar.

Vannprøver

I et vakuumfiltreringssystem og steriliserte 100 ml vann filtreres under studien, og deretter den mikroporøse membran på 0,4 mikron er fjernet med sterile pinsetter og plassert på en plate Baird Parker. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C. Denne teknikken tillater telling av typiske kolonier av S. aureus.

Kvalitetskontroll

For å evaluere kvaliteten på Baird Parker agar, kan kjente stammer brukes, for eksempel Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

I tilfelle av stammer av S. aureus ATCC er kjent for å redusere telluritt, og de er positiv lipase og lecitinase. Derfor må det være en tilfredsstillende utvikling og vokse konvekse kolonier med svart senter og fargeløs kant, med en uigennemsiktig halo og en annen halo mer ekstern klar.

På den annen side, S. epidermidis dårlig utvikling er forventet i dette mediet, med gråbrun til svarte kolonier, ingen klar halo.

til E. coli og P. mirabilis Det forventes å være helt eller delvis hemmet. Ved voksing, vil brune kolonier utvikle seg uten ugjennomsiktig sone eller klar halo.

anbefalinger

-Mediet bør ikke oppvarmes etter å ha tilsatt telluritten og eggeplommen.

-Fremstillingen av eggeplommeemulsjonen og dens tilsetning i mediet er et svært sårbart forurensningsstadium. Ekstrem omsorg må tas.

-Hvis det er tilstedeværelse av typiske kolonier av S. aureus må bekreftes ved å montere en koagulasetest på nevnte stamme.

-Hvis det er tvilsomme resultater med koagulase, må andre bekreftende tester monteres.

-Vær forsiktig så du ikke forveksler tilstedeværelsen av typiske kolonier av S. aureus med de atypiske koloniene av svart farge.

referanser

1. Wikipedia bidragsytere. Baird-Parker agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. mars 2017, 19:36 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org/ Tilgang 18. februar 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Tilgjengelig på: bd.com
3. Laboratorier Britania. Baird Parker agar base. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Tilgjengelig på: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratorier Britania. Kalium telluritt. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus enterotoxigenic type A, i nasopharyngeal smears i food handlers. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Mat. Isolasjon og telling Staphylococcus aureus. Tilgjengelig i:sencamer.gob.ve