Agar BHI grunnlag, forberedelse og bruk



den BHI agar eller hjernehjerteinfusjonsagar er et næringsrikt, fast dyrkningsmedium. På spansk refererer vi til det som hjerneinfusjonsagar. Det er et ikke-selektivt kulturmedium, noe som betyr at alle typer Gram-positive og Gram-negative bakterier kan utvikles, så vel som noen gjær og filamentøse sopp.

Det er sammensatt av hjerne-hjerte-infusjon oksekjøtt, peptisk hydrolysat av animalsk vev, bukspyttkjertel kaseinhydrolysat, natriumklorid, glukose, dinatriumfosfat og agar.

Det bør bemerkes at BHI-agar er et av de vanligste kulturmediene i bakteriologilaboratorier. Den kan brukes uten kosttilskudd som primærkultur, subkultur av kolonier oppnådd i andre selektive medier eller for vedlikehold av stammer i laboratoriet.

På den annen side er det et ideelt medium som skal brukes som base i fremstillingen av beriket medium, for eksempel blodagar og sjokoladeagar. Begge er ideelle for å isolere krevende mikroorganismer fra næringsmessig synspunkt. Imidlertid må det tas hensyn til at siden det inneholder glukose, er det ikke tilstrekkelig å observere mønstrene av hemolyse.

På samme måte kan BHI-agar brukes til fremstilling av spesielle midler for isolering av patogene mikroorganismer med vanskelig vekst i vanlige medier, blant dem: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae og Histoplasma capsulatum.

Med antibiotikaadditivet blir BHI-agar et selektivt medium for isolering av sopp.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 kiler
    • 2.2 Plater
    • 2.3 Fremstilling av blodagar
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Bruk uten kosttilskudd
    • 3.2 Som en base agar for fremstilling av andre medier
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referanser

fundament

Det er et næringsrikt kulturmedium for å isolere moderat krevende mikroorganismer, å kunne øke sin anrikning med tilsetning av blod og andre kosttilskudd.

Det er et ikke-selektivt kulturmedium, derfor tillater det veksten av de fleste Gram-positive og Gram-negative bakterier, samt noen sopp. Det kan imidlertid bli selektivt med tilsetning av antibiotika.

Mediet inneholder infusjon av kalvhjerne og hjerte, peptidhydrolysat fra animalsk vev og kasein pankreatisk hydrolysat; alle disse forbindelsene virker som kilder til vitaminer, aminosyrer, nitrogen og karbon.

Glukose er et karbohydrat som gir energi til mikroorganismer når de har gjæret det. Mens natriumklorid og dinatriumfosfat opprettholder den osmotiske likevekten og gir en pH nær nøytralitet. Til slutt gir agaren den faste konsistensen til mediet.

forberedelse

Vekt 52 gram av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Ta blandingen til en kilde til varme til den koker, rør ofte under oppløsningen.

Du kan klargjøre kiler eller plater av BHI-agar uten tilsetningsstoffer.

klosser

For fremstilling av preparatene kiler tjener til å fylle halvparten av hvert rør, deksel og autoklavert ved 121 ° C i 15 minutter, fremstår på en basis seng til fast stoff. Deretter oppbevares i kjøleskap til bruk.

plater

Den oppløste blanding autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter, når den forlater, får den avkjøles til 50 ° C og 20 ml av mediet serveres i sterile petriskåler. De får stivne, invertere og lagre i kjøleskap til de brukes. La platene ta romtemperatur før planting.

Medietes pH bør være 7,4 ± 0,2.

Det uforberedte mediet er beige og tilberedt er lysgult.

Fremstilling av blodagar

Etter steriliserende medium, avkjøling til en temperatur på ca. 45 til 50 ° C, tilsett deretter blod (50 ml), bland forsiktig og tjener til å homogenisere aseptisk 20 ml i hver petriskål. Hvis bobler dannes på platen, bør brennens flamme raskt passere over boblene for å eliminere dem.

På samme måte kan spesielle medier fremstilles ved å tilsette de tilsvarende additiver når blandingen når temperaturen 45 til 50 ° C.

Mediet er kirsebærrødt.

søknader

Bruk uten kosttilskudd

BHI-agar uten additiver er nyttig som en primærkultur og for planting av rene stammer av mikroorganismer som er middels eller moderat krevende for senere identifikasjon.

Som et middel lys farge, er den ideell for å se pigmenter og også ikke inneholder forstyrrende stoffer kan utføres på ham noen biokjemiske tester som oksidase og katalase, eller montere andre biokjemiske prøver fra kolonier fra denne agar.

På samme måte er BHI agar kiler mye brukt for vedlikehold av stammer for en bestemt tid i laboratoriet (bacterioteca).

Plater eller kiler plantet på overflaten med bakteriestammer blir inkubert ved 37 ° C i 24 til 48 timer. Mens i svampe vil temperaturen og inkubasjonstiden avhenge av hvilken type sopp som er søkt.

Som base agar for fremstilling av andre medier

Med denne basen kan du lage berikede og selektive medier.

anriket

Hovedfunksjonen er å tjene som grunnlag i forberedelsen av blodagar for rutinemessig bruk i mikrobiologilaboratorier. Spesielt bidrar BHI-basen til isolering av stammer av Streptococcus sp. Imidlertid har den ulempen ved ikke å være egnet for observasjon av hemolysemønstre fordi den inneholder glukose.

Det brukes også til fremstilling av kanin eller hest blod agar for isolering av Haemophilus sp. For bedre resultater kan du legge til et anriknings supplement (IsoVitaleX).

Hvis prøvene kommer fra luftveiene til agar, kan bacitracin bli tilsatt for å hemme den medfølgende floraen og øke sannsynligheten for utvinning av stammer av Haemophilus sp.

På den annen side kan blodagar (lamm eller menneske) fremstilles med tellurittcystein for å isolere Corynebacterium diphtheriae. På samme måte er det nyttig å fremstille kaninblodagar, med tilsetning av cystin og glukose for isolering av Francisella tularensis.

Frø av blodagarplater gjøres ved utmattelse og inkuberes ved 35-37 ° C i 24-48 timer i mikroerofil (5-10% CO)2).

selektiv

Dette mediet med tilsetning av antibiotika kan erstatte Sabouraud-agar for isolering av sopp.

Kombinasjonen av BHI agar med kloramfenikol - gentamicin eller penicillin-, streptomycin og hesteblod er ideell for isolering av Histoplasma kapulatum.

Avhengig av mikroorganismen som skal isoleres, anbefales inkubasjon ved 35-37 ° C eller ved romtemperatur i aerobiosis. Noen ganger er inkubasjon nødvendig i begge temperaturområdene, ved bruk av 2 plater for dette.

Noen sopp liker Trichophyton mentagrophytes De bør inkuberes ved romtemperatur i opptil 7 dager.

Kvalitetskontroll

Fra hver batch tilberedt anbefales det å inkubere 1 plate eller kile ved 37 ° C i 24 timer og verifisere at det ikke er noen vekst; Spesielt viktig når du preparerer blodagar, fordi det er et lett forurenset medium.

På den annen side kan kvaliteten på mediet evalueres ved å inokulere kjente eller sertifiserte standardstammer og observere deres utvikling.

I denne forstand, å evaluere BHI agar uten tilsetningsstoffer, stammer av Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231. De inkuberes ved 37 ° C i aerobiosi i 24 til 48 timer. I alle tilfeller forventes tilfredsstillende vekst.

For å evaluere blod agarplater, stammer av  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i mikroerofilikus i 24 timer, mens soppen inkuberes ved romtemperatur i et fuktig kammer i opptil 7 dager. I alle tilfeller forventes tilfredsstillende vekst.

referanser

  1. Laboratorier Britania. Brain Heart Infusion Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Brain Heart Infusion Agar. 2009.
  4. Neogen laboratorium. Brain Heart Infusion Agar. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar blod: grunnlag, bruk og forberedelse. 2018. Tilgjengelig på: lifeder.com.
  6. Wikipedia bidragsytere. Hjernen infusjon Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. september 2018, 03:58 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org. Tilgang 2 mars 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.