Cetrimida agar grunnlag, forberedelse, bruk



den cetrimidagar eller cetrimid er et selektivt fast dyrkningsmedium, designet for isolering av Pseudomonas aeruginosa. Den er basert på å fremheve produksjonen av pigmenter som er karakteristisk for denne arten, og ble utviklet fra modifikasjonen av Tech agar, skapt av King, Ward og Raney.

Den opprinnelige formelen inneholdt magnesiumkloridsalter, kaliumsulfat, bukspyttkjertelgelatin-fordøyelse og agar-agar. Modifikasjonen av formelen besto av tilsetning av cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) og glyserol.

Cetrimidagar er nyttig for den mikrobiologiske studien av prøver der tilstedeværelsen av Pseudomonas aeruginosa. Det bør bemerkes at denne bakterien er av stor betydning, fordi den selv er en del av den normale miljømikrobiotikken, oppfører seg ofte som et opportunistisk patogen..

Derfor er en av de vanligste problemer som forårsakes av denne bakterien er sykehusinfeksjoner, det vil si de som oppstår i sykehusmiljø, angriper pasienter med depressive immunforsvar.

Videre, på grunn av affiniteten av denne organisme med fuktighet, hvite mer sårbare forurensning de er: pusteutstyr, medisiner, forstøvere, vannfontener, luftkondisjoneringsanlegg, desinfeksjonsmidler, såpeoppløsninger, injiserbare oppløsninger, åpne sår , katetere, urinkateter, etc..

I denne forstand er cetrimidagar mulig å utføre mikrobiologiske kontroller og avlinger til de tidligere nevnte elementene.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Fortolkning
  • 2 Fremstilling
  • 3 bruksområder
  • 4 Seeded
  • 5 begrensninger
  • 6 Kvalitetskontroll
  • 7 referanser

fundament

Cetrimidagar er basert på medietes evne til å fremme veksten av P. aeruginosa, stimulere produksjonen av pigmentene og i sin tur hemme veksten av andre mikroorganismer.

Disse egenskapene skyldes funksjonen som hver av komponentene oppfyller. Den tilstede gelatinpepton tjener som en kilde til nitrogen, vitaminer og mineraler. Glyserol eller glyserin virker som en karbonkilde.

For sin del er cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) stoffet som hemmer veksten av andre bakterier enn P. aeruginosa, inkludert andre arter som tilhører samme slekt.

Inhibering oppstår fordi cetramid virker som et kationisk vaskemiddel, destabiliserer plasmamembranen av de fleste bakterier, med unntak av P. aeruginosa og noen andre som klarer å overleve.

På den annen side inneholder den magnesiumklorid og kaliumsulfat. Disse forbindelsene stimulerer fenotypisk uttrykk relatert til kapasiteten til Pseudomonas aeruginosa å produsere forskjellige pigmenter, blant dem: pyocyanin, pioverdin, piorubin, piomelanin og fluorescein. Endelig inneholder den agar-agar, noe som gir den solid konsistens.

tolkning

Fortolkningen av veksten oppnådd i denne agar er gjort på følgende måte:

Observere, glatte, runde kolonier med jevne kanter, som produserer blå-grønn, grønn, brun eller rødlig pigmenter, mer fruktig lukt utslipps (acetofenon), er et sannsynlig resultat av tilstedeværelsen av denne bakterien i prøven.

På den annen side er det tegn på P. aeruginosa observasjon av et lyst gulgrønt pigment på koloniene når platen blir utsatt for ultrafiolett lys.

Legg merke til at hver farge observeres er på grunn av produksjon av et spesifikt pigment. Den blå-grønt pigment tilsvarer pyocyanin produksjon, til pyoverdin grønn, rødlig til piorrubina, brun til grønnaktig piomelanina og lys gul- fluorescens under ultrafiolett lys for å fluorescein.

forberedelse

Veid 43 g av dehydratiserte medium og oppløs i destillert vann. Tilsett 10 ml glyserol. Ta blandingen til en varmekilde. La det koke i noen minutter til fullstendig oppløsning.

Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. La stå og server i sterile petriskål når temperaturen er rundt 50 ° C.

Tillat å størkne, invertere, bestille i plaquers og lagre i kjøleskap til bruk. For å plante cetrimid agarplater, bør de fjernes fra kjøleskapet på forhånd og får ta romtemperatur..

Den endelige pH i mediet bør være 7,2 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er beige og preparatet er ugjennomsiktig hvitt.

søknader

Cetrimid agar kan brukes til å plante alle typer prøver der tilstedeværelsen av Pseudomonas aeruginosa. Derfor er det nyttig i alle områder av mikrobiologi (miljø, industri, klinikk, vann og mat).

Det er av stor betydning å analysere sykehusmiljøer og dermed kunne anvende korrigerende mediations, da denne mikroorganismen når pasienter gjennom utstyr, medisiner, løsninger og forurensede forsyninger som pasienten bruker.

På denne måten kan mikroorganismen infisere det nedre luftveiene, urinveiene og sårene av immunsuppressive pasienter.

Koloni teller kan også gjøres P. aeruginosa i mikrobielle grenseprøver.

plantet

Cetrimidagar kan brukes som primærkultur. Platen er inokulert i en av kantene og derfra fordeles den av utmattelse til resten av platen. Væskeprøver kan så på overflaten med en drigalski-spatel.

Platene inkuberes i aerobiosis ved 37 ° C i 24 timer inkubering.

begrensninger

-En liten prosentandel av stammer av  Pseudomonas aeruginosa Ikke produser pyocyanin, så du kan tolke en falsk negativ.

-Noen arter av Pseudomonas av klinisk betydning er hemmet i dette mediet.

-Til tross for å observere egenskapene beskrevet for Pseudomonas aeruginosa, De må bekreftes med tilleggsidentifikasjonstester. En test som ikke bør gå glipp av, er oksidasetesten, den skal være positiv.

-Noen enterobakterier kan vokse i dette mediet og utvikle et gul pigment, men det adskiller seg fra Pseudomonas aeruginosa i hvilken når platen blir utsatt for ultrafiolett lys, er det ingen fluorescens.

-Serratia marcescens klarer å utvikle og produserer et rosa pigment.

-Hvis plakkene som er frøet med cetrimidagar, eksponeres for en tid ved romtemperatur, blir stammer av P. aeruginosa de kan miste fluorescensen observert under ultrafiolett lys, men egenskapen gjenvinnes dersom den reinkuberes ved 37 ° C.

Kvalitetskontroll

For å teste riktig funksjon av cetrimidagar kan kontrollstammer brukes, for eksempel: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

De forventede resultatene er:

  • til P. aeruginosa god vekst, med blågrønn pigment og positiv fluorescein.
  • S. maltophilia og S. aureus vil bli delvis eller helt hemmet.
  • Det forventes at Escherichia coli bli fullstendig hemmet.

referanser

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypisk og serologisk karakterisering av kliniske isolater fra Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratorier Conda Pronadisa. Cetrimid-agarbase. 2014. Tilgjengelig på: condalab.com
  3. Laboratorier Britania. Cetrimida agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  4. BD Laboratories BD Pseudosel agar (Cetrimid agar). 2013. Tilgjengelig på: bd.com
  5. Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Cetrimid-agar. 2009. Tilgjengelig på: http://f-soria.es