Agar sjokolade fundament, bruk og forberedelse



den sjokolade agar Det er et fast kulturmedium anriket, ikke-selektive og ikke-differensial. Det er i hovedsak brukt for isoleringen av krevende mikroorganismer fra det ernæringsmessig synspunkt, selv om det kan vokse eventuelle bakterier.

Derfor øker bruken sin spesielt i såing av prøver som normalt er sterile, for eksempel CSF og leddvæske. Selv om det også inkluderes i de middel som er valgt for å plante polymikrobielle prøver, men i disse tilfeller er tilsetningen av antibiotika som hemmer ledsagende flora er nødvendige.

Dette mediet har en svært lik karakteristisk sjokolade brun farge, derav navnet. Fremstillingen er meget lik blodagar, men i dette tilfellet blodet må varmes opp for at de røde blodlegemene brister.

Dens forberedelse, som blod agar, er veldig delikat, da det er lett forurenset. Av denne grunn foretrekker mange laboratorier å kjøpe dette mediet som allerede er utarbeidet av kommersielle hus som garanterer kvaliteten.

index

  • 1 Foundation
  • 2 bruksområder
    • 2.1 Sjokoladeagar beregnet på Columbia agar
    • 2.2 Sjokoladeagar laget med GC base agar (for gonokokker)
    • 2.3 Chocolate agar forberedt med Müeller Hinton agar
    • 2.4 Sjokolade agar forberedt med Thayer Martin agar
  • 3 Fremstilling
    • 3.1 Beregninger
    • 3.2 Vekt og oppløs
    • 3,3 sterilisere
    • 3.4 Aggregering av blod
    • 3,5 En annen måte å tilberede sjokolade agar uten å bruke blod
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referanser

fundament

Dette mediet består av en base av agar rik på næringsstoffer og oppvarmet blod. Hemolysen av røde blodlegemer gir faktor X (hemin) og faktor V (NAD), som er nødvendige for veksten av noen mikroorganismer, som slekten. Haemophilus. Det er også veldig nyttig for isolering av Neisserias sp.

Som blod agar kan forskjellige medier brukes som base agar avhengig av behovet. Blant media som brukes er hjerneinfusjon og tryptikase soya agar, selv om den mest anbefalte er Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar og Thayer Martin agar..

Noen varianter av sjokolade agar inkluderer et kommersielt tilgjengelig beriket supplement som heter Isovitalex eller Polivitex.

Disse kosttilskudd inneholder vitamin B12, L-glutamin, adenin, guanin-hydroklorid, p-aminobenzosyre, nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD), tiaminpyrofosfat, ferrinitrat, tiaminhydroklorid, cystein-hydroklorid, L-cystin og glukose.

Det er viktig å merke seg at sjokoladeagar er mer beriket enn blodagar, men tillater ikke observasjon av hemolysemønster.

søknader

Sjokoladeagar laget med Columbia agar

Dette mediet inneholder kasein og hjerte bukspyttkjertel fordøyd, fordøyd kjøttpeptid, natriumklorid, agar, gjærekstrakt og maisstivelse. Den er også rik på vitaminer, mineraler og essensielle aminosyrer.

Denne basen med oppvarmet blod er ideelt for isolering av bakterier av slekten Neisseria. På den annen side, hvis et tillegg for Brucella blir tilsatt til mediet, kan den nevnte mikroorganismen isoleres. Resultatene er forbedret ved hjelp av hesteblod.

Sjokolade agar fremstilt med GC base agar (for gonokokker)

Dette mediet inneholder pepton, maisstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumklorid og agar.

De fleste sjokolade-agar-presentasjoner er kommersielt fremstilt med denne base og inneholder oppvarmet blod, men en syntetisk blanding av hemin og en kjemisk tilskudd av vekstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, glukose og faktor V.

Sjokolade agar forberedt med Müeller Hinton agar

Det brukes til å utføre antimikrobiell sensitivitetstest av krevende mikroorganismer, for eksempel Streptococcus pneumoniae bruker 5% oppvarmet ramblod.

Den tjener også til primær isolering av Neisserias og Haemophilus, men i det spesielle tilfellet isolering av Haemophilus bruken av hesteblod er foretrukket, da det er en rik kilde til faktor X og V.

Dessuten, dersom prøven til planten kommer fra et ikke-sterilt område det er å anbefale å tilsette antibiotika for å hemme den normale flora i området.

Eksempel på respiratoriske prøver hvor tilstedeværelsen av bakterier i slekten er mistenkt Haemophilus Bacitracin brukes til å hemme veksten av Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og Saprophytic Neisseria.

Når det gjelder prøver av kjønnsorganer, hvor det er mistanke om det Haemophilus ducreyi, har vært brukt med hell sjokolade-agar ble fremstilt som følger: Mueller - Hinton agar med 5% hesteblod chocolatizada, 1% Isovitalex anrikning og 3 ug / ml vancomycin.

Sjokolade agar forberedt med Thayer Martin agar

Dette mediet er spesielt for isolering av Neisseria gonorrhoeae. Den må inneholde antibiotika for å hemme den medfølgende floraen. Lamblod brukes.

forberedelse

Indikasjonene for fremstilling av basaragar som skal brukes, bør ses. De er på baksiden av pakken med dehydrert medium. De beskriver vanligvis hvor mye som skal veies for å forberede en liter kulturmedium.

I laboratoriet kan du forberede nøyaktig ønsket mengde, det kan være mer eller mindre enn en liter.

beregningene

En regel på tre er laget for å beregne hvor mye skal veies for å forberede volumet som er ønsket. eksempel:

Hvis det for 1 liter er nødvendig å veie 40 gr og laboratoriet krever 800 ml, sies det:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formelen vil være som følger:

X = 32 gr (mengde veier for 800 ml).

Vekt og oppløs

Vi fortsetter å veie det nødvendige beløpet og plassere det i en fiola med vann.

Varm til moderat varme og bland forsiktig med roterende bevegelser til det dehydrerte mediet er fullstendig oppløst, la det koka i 1 minutt.

sterilisere

Fiolaen blir introdusert i autoklaven for å sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter.

Sammensatt av blod

Når du forlater autoklaven, står den igjen til temperaturen i mediet er omtrent mellom 56 til 70 ° C for å plassere blodet og blande til mediet blir brun.

Hvis du skal legge til kosttilskudd, er det på tide å gjøre det. Bland deretter og server 20 ml til hver steril petriskål.

Hele prosedyren må utføres i en laminær hette eller rundt Bunsen-brenneren.

La stå til de stivner og hold omvendt i kjøleskapet.

En annen måte å tilberede sjokolade agar uten å bruke blod

Basismediet fremstilles som beskrevet ovenfor, det kommersielt oppnådde dehydrerte hemoglobin oppløses og steriliseres i autoklaven.

Begge løsningene får avkjøles til 50 ° C, delta og tilsett tilsettet. Bland i aseptiske forhold og server deretter i sterile petriskål.

Kvalitetskontroll

Det er viktig at blodet er plassert ved den angitte temperaturen, fordi den er ideell til å lyse de røde blodcellene og samtidig opprettholde faktor V som er termosensitiv.

Det bør ikke være noen bobler på overflaten av agar. Hver sats på 100 plater bør inkuberes en eller to plater i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for å kontrollere steriliteten.

For best resultat bør sjokoladeagar brukes kort tid etter forberedelse.

Skal være i laboratoriebakteriestammer som kontroller for å vurdere effektiviteten av friskt medium for veksten av krevende mikroorganismer større klinisk viktig.

referanser

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2. utgave. UCA Publikasjonstjeneste.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodriguez C, Guzman D, Llop A. gjennomførbarheten av bruk av kulturmediet basert på agar GC-Biocen Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Tilgjengelig på: scielo.sld.
  5. Wikipedia bidragsytere. Sjokolade agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. desember 2018, 19:54 UTC. Tilgjengelig på: en.wikipedia.org.