Simmons citrat agar grunnlag, forberedelse og bruk



den Simmons Citrate agar Det er et fast medium som brukes som en biokjemisk test for å identifisere mikroorganismer, spesielt gramnegative baciller. Det opprinnelige mediet ble opprettet av Koser i 1923.

Kosers Citrate-medium besto av en buljong inneholdende natriumfosfat, ammoniumfosfat, monokaliumfosfat, magnesiumsulfat og natriumsitrat..

Som det kan ses, er den eneste karbonkilde i mediet citrat, og nitrogen er ammoniumfosfat, utelatelse proteiner og karbohydrater for disse elementer, som vanligvis er tilstede i andre media.

Derfor kan bakterien som er inokulert i det mediet, bare gjengi hvis den er i stand til å ta sitratkolet. Testen var positiv dersom det var turbiditet i mediet, men det hadde ulempen at ikke-spesifikk turbiditet kunne oppstå.

Dette problemet ble løst ved at Simmons tilsatte agar og bromothymolblått til Kosers opprinnelige formel. Selv om prinsippet er det samme, tolkes det annerledes.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Sjømodus
    • 1.2 Fortolkning
  • 2 Fremstilling
  • 3 Bruk
  • 4 Endelige hensyn
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Seeded
    • 4.3 Fargeintensitet
  • 5 referanser

fundament

Noen bakterier har evnen til å overleve i fravær av gjæring eller produksjon av melkesyre, som trenger å få energi ved bruk av andre substrater. I denne testen er den eneste kilden til karbon som tilbys, citrat.

Bakterier som er i stand til å overleve under disse forholdene, metaboliserer citrat raskt gjennom et alternativ til den tradisjonelle ruten, ved bruk av tricarboxylsyre syklusen eller citratfermenteringssyklusen.

Citrat-katabolisme av bakterier omfatter et enzymatisk mekanisme uten innblanding av coenzym A. Dette enzym er kjent for å citricasa (oksaloacetat-citratlyase) eller desmolase citrat. Reaksjonen krever tilstedeværelse av en bivalent kation, som i dette tilfelle tilføres av magnesiumet.

Reaksjonen genererer oksaloacetat og pyruvat, som deretter gir opphav til organiske syrer i midten av en alkalisk pH dannet ved bruk av nitrogenkilden. Disse organiske syrer brukes som en karbonkilde som genererer karbonater og bikarbonater, og alkaliserer videre mediet.

Såningsmodus

Simmons citratmedium bør lett inokuleres i fiskestål ved å bruke straight sløyfe eller nål, og inkuberes i 24 timer ved 35-37 ° C. På slutten av tiden observeres resultatene.

Frøing skjer kun på overflaten av agar. Ikke gjør punktering.

tolkning

Hvis mediet er av den opprinnelige fargen (grønn) og det ikke er synlig vekst, er testen negativ, men hvis mediet endres til blått, indikerer det forekomst av alkaliske produkter som detekteres av pH-indikatoren. I dette tilfellet er testen positiv.

Dette skjer fordi hvis bakterien bruker karbonet av citratet, er det også i stand til å ta nitrogen av ammoniumfosfatet med hvilket det frigjør ammoniakk, alkaliserer mediet.

På den annen side, dersom veksten av bakterier i mediet ble observert, men ingen fargeendring, også prøven bør betraktes som positiv, fordi hvis det er vekst betyr at bakterien var i stand til å bruke citrat som en karbonkilde, selv om det ikke er en pH-endring for øyeblikket (noen ganger kan det ta).

Hvis det er tvil i tolkningen av den endelige fargen, kan den sammenlignes med et rør av ikke-injisert citrat.

forberedelse

Veid 24,2 g av dehydratiserte medium for en liter vann. Bland og la stå i 5 minutter ca. Fullfør oppløsningen av mediet ved oppvarming i 1 eller 2 minutter, omrøring ofte.

Server 4 ml i reagensrør og autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Når du forlater autoklaven, vippes ved hjelp av en støtte på en slik måte at agar størkner i form av en fløyte-topp med liten klem eller bunn og mer skråning.

Den endelige pH av citratmediet er 6,9 (grønt). Dette mediet er svært følsomt for pH-endring.

Ved pH 6 eller under blir mediet gult. Denne fargen observeres ikke i testen med bakterier.

Og ved pH 7,6 eller høyere endres mediet til intens preussisk blå.

bruk

Simmons citratagar brukes til identifisering av visse mikroorganismer, særlig baciller som tilhører familien Enterobacteriaceae og andre glukose-ikke-fermenterende baciller..

Endelige hensyn

Simmons citratmedium er en meget delikat test, fordi falske positiver kan oppnås hvis visse feil blir gjort.

Den omsorg som må tas er følgende:

pode

Ikke gjør en veldig tykk eller belastet bakteriell pode fordi det kan føre til en kobber gul i stedet for frø utvikler, uten å påvirke resten av omgangen, men tror at det er vekst. Det samme betyr ikke positivitet av testen.

På samme måte kan et tykt inokulum generere en falsk positiv, fordi preformede organiske forbindelser i celleveggene til døende bakterier kan frigjøre nok karbon og nitrogen for å snu pH-indikatoren.

Derfor er idealet å plante ved hjelp av nålen i stedet for platinahåndtaket, for å unngå å ta for mye materiale.

plantet

På den annen side, når batteriet blir plantet for biokjemisk identifikasjon av organismen aktuelle tester, er det viktig at prøven av citrat er den første som skal inokuleres, for å forhindre medrivning av protein eller karbohydrat andre måter.

Under denne omstendigheten er det mulig å oppnå en falsk positiv, fordi noen av disse stoffene som introduseres ved en feil, vil bli metabolisert og forårsake en endring i pH.

En annen måte å unngå dra av stoffer er å brenne håndtaket godt og ta nytt inokulum mellom en test og en annen.

Det må også tas vare på når du berører kolonien for å utføre inokulumet, da det bør unngås å trekke en del av agar fra kulturen som bakteriene kommer fra, på grunn av den tidligere forklarte.

I denne forstand anbefaler Matsen, Sherris og Branson å fortynne inokulumet i fysiologisk oppløsning før inokulering av citrattesten for å unngå overføring av andre karbonkilder.

Fargeintensitet

Det må tas hensyn til at intensiteten til fargen som produseres når testen er positiv, kan variere i henhold til det kommersielle huset.

I tillegg er det mikroorganismer som tester positive i 24 timer, men det finnes andre stammer som krever 48 timer eller mer for å gi en endring i pH.

referanser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Tilgjengelig på: bd.com
  5. Laboratorier Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016. Tilgjengelig på: andinamedica.com.