Agar CLED grunnlag, bruk og forberedelse



den CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) er et differensielt fast kultur medium, som brukes til diagnostisering av urinveisinfeksjoner. Sammensetningen av kulturmediet er utformet for god vekst av urinpatogener og er ideell for kvantifisering av kolonidannende enheter (CFU).

CLED-kulturmediet er ikke-selektivt, siden Gram-negative og også Gram-positive mikroorganismer kan vokse i den. Men dette er ikke et problem, siden de fleste urinveisinfeksjoner skyldes en enkelt type mikroorganismer.

I tilfelle av polymikrobielle infeksjoner kan 2 eller 3 forskjellige bakterier oppnås, men det er svært sjeldent og mesteparten av tiden er det forurensede prøver.

Blant de gramnegative bakteriene som kan vokse i dette mediet, er bacillene som tilhører familien Enterobacteriaceae og andre enteriske baciller, uropatogenene er oftest isolert i urinprøver, følgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, blant annet.

På samme måte er blant Gram-positive bakterier som kan vokse i dette mediet Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp og de kan til og med vokse gjær, som komplekset Candida albicans.

På grunn av den kjemiske sammensetningen av mediet tillater det imidlertid ikke veksten av noen krevende genitourinske patogener, slik som Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, blant annet.

index

  • 1 Foundation of the CLED agar
  • 2 Foundation of the CLED agar (Bevis)
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Såing urinprøver
    • 3.2 Fortolkning
    • 3.3 Identifikasjon
  • 4 Fremstilling
  • 5 referanser

Stiftelsen av CLED agar

CLED-dyrkningsmediet har som energikilde kjøttekstrakt, kasein pankreatisk hydrolysat og gelatinhydrolysat. De gir næringsstoffene for utvikling av utmattende bakterier.

Den inneholder også cystin, en aminosyre som tillater vekst av coliforms, skiller seg ut av sin lille størrelse.

Likeledes inneholder laktose gjærbar karbohydrat, derfor er dette mediet differensielt; å skille de fermenterende bakteriene fra den ikke-fermenterende laktose.

Fermenterende bakterier slår innstille pH-verdien av den syreproduksjonen for utvikling av gule kolonier, mens ikke-fermentative bakterier ikke genererer endringer i miljøet, og dermed ta fargen på den opprinnelige agar, grønn.

Fermenteringsreaksjonen blir avslørt takket være tilstedeværelsen av pH-indikatoren, som i dette mediumet er bromtymolblått.

På den annen side hemmer den lave elektrolyttkonsentrasjonen av mediet den typiske invasive veksten av slekten Proteus, kalt swarming effekt. Dette gir en fordel med hensyn til andre måter, siden det tillater telling av UFC, inkludert om Proteus slekten er tilstede.

Imidlertid hemmer den lave konsentrasjonen av elektrolytter veksten av noen arter av slekten Shigella, å være dette en ulempe med hensyn til andre midler.

Grunnlag for CLED agar (Bevis)

Det finnes en variant eller modifikasjon av dette mediet laget av Bevis, som innlemmet den opprinnelige fuchsinsyrekomposisjonen (Andrade-indikatoren) i den opprinnelige sammensetningen. Det virker sammen med bromothymolblått for å skille gjæring fra ikke-fermenterende bakterier.

Forskjellen mellom det konvensjonelle og det modifiserte mediet er fargen vedtatt av koloniene. I tilfelle av laktosefermenterende bakterier, kolonier utvikle en rødlig orange med en rosa eller røde halo, mens nonfermenters er blå-grå.

søknader

CLED agar brukes utelukkende til såing av urinprøver. Bruken av dette mediet er spesielt vanlig i europeiske laboratorier, mens det i Amerika er mindre brukt.

Samlingen av prøven må oppfylle visse parametere for å oppnå pålitelige resultater, inkludert:

  • Ikke tar antibiotika før du tar prøven.
  • Ta helst urinen fra den første timen på morgenen, siden den er mer konsentrert når det ikke er mulig å ta prøver ved hjelp av invasive metoder.
  • Vask kjøttet grundig før du tar prøven.
  • Kast den første urinasjonsstrømmen og sett deretter beholderen.
  • Samle mellom 25 og 30 ml urinen i sterile merkede beholdere.
  • Ta umiddelbart til laboratoriet omgitt av is.
  • Det må behandles før 2 timer med utslipp eller kjøles ved 4 ° C i maksimalt 24 timer.

Såing urinprøver

Urinprøven må fortynnes 1:50.

Til fortynning plasserer du 0,5 ml pasientens urin og fortynner med 24,5 ml steril fysiologisk oppløsning.

Mål 0,1 ml av fortynnet urin og så per overflate med en drigalski-spatel på CLED-mediumet. Dette er seedmetoden som er angitt for å telle kolonier. Det er derfor det brukes i urinprøver, siden resultatene må uttrykkes i CFU / ml.

For kvantifisering av disse koloniene, gå frem som følger: telle koloniene og multiplisere ved hjelp av platen 10 og deretter 50. Dette oppnår antall CFU / ml urin.

tolkning

Teller over 100.000 CFU / ml-Indica urinveisinfeksjon

Teller under 1000 CFU / ml- Ingen infeksjon

Telling mellom 1000-10.000 CFU / ml -Feilig, mulig forurensning, gjenta prøveuttagning.

identifikasjon

Koloniene som vokser på CLED-agar, bør fremstilles et gram og avhengig av mikroorganismens morphotypeintensive egenskaper, utføres en viss subkultur.

For eksempel, hvis det er en Gram-negativ basill plantes på en MacConkey-agar, hvor fermentering eller laktose blir bekreftet. I tillegg er en næringsrik agar festet til å utføre oksidasetesten.

Dersom Gram avslører Gram-positiv kokos, kan den subkultiveres i salt mannitolagar og i næringsmiddelagar. I sistnevnte gjennomføres katalastesten. Til slutt, hvis gjær blir observert, vil det bli sådd på en Sabouraud-agar.

Mange laboratorier hindrer bruken av CLED-mediet og foretrekker å bare bruke blodagar, MacConkey og næringsmiddel agar til å så urinprøver.

forberedelse

I et hetteglass med 1 liter destillert vann, oppløs 36,2 gr pulverisert CLED-agar. Etter 5 minutter hviler du opp resuspendert agar, blandes konstant til koking i 1 minutt.

Steriliser deretter ved 121 ° C i 15 minutter i autoklaven. Når tiden er ferdig, fjernes den fra autoklaven og får avkjøle til den når en temperatur på 45 ° C. Deretter serveres mellom 15-20 ml i hver steril petriskål.

Prosedyren for betjening av platene må utføres inne i en laminær hette eller foran Bunsen-brenneren for å unngå forurensning.

Plater serveres får stivne, bestilles i en plateholder omvendt og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.

Den endelige pH av det fremstilte mediumet skal være 7,3 ± 0,2.

referanser

  1. Anbefalinger for mikrobiologisk diagnose av urinveisinfeksjon. chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Tilgjengelig på: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikasjon av det mikrobielle middel som forårsaker urininfeksjoner hos interne pasienter som gjennomgår blærekateterisering. 2016. Grunnarbeid for å søke om tittel lisensiering i klinisk laboratorium. Technical University of Ambato. Ecuador.
  3. Laboratorier Britania. Half CLED. Tilgjengelig på: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Instruksjoner for bruk, CLED Agar. 2013 Tilgjengelig på: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Grunnleggende håndbok for mikrobiologi. Tilgjengelig på: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodriguez-Creixems M, Diaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agar alternativet i urin kultur rutine. En prospektiv og komparativ vurdering. Diagnostisk mikrobiolinfeksjonsdis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2. utgave. UCA Publikasjonstjeneste.