Agar har standard grunnlag, forberedelse og bruk

den standard konto agar er et solidt, ikke-selektivt kulturmedium, designet for kvantifisering av den aerobiske mikrobielle belastningen tilstede i prøver av drikkevann, avløpsvann, melkehansker, blant annet matvarer. Dette mediet er også kjent som PCA-agar, for sin akronym i engelsk Plate Count Agar. Den ble opprettet i 1953 av Buchbinder, Baris og Goldstein.

Standard agar medium kontoen består av gjærekstrakt, triptein, glukose, agar og destillert vann. Denne formuleringen inneholder grunnleggende ernæringselementer som tillater utviklingen av den nåværende aerobiske mikrobielle belastningen, ikke krevende.

Ettersom mediet ikke inneholder inhibitorer, kan bakteriene utvikles uten noen restriksjoner, så det er ideelt for den generelle kolonitellingen. Plattekvantifiseringsteknikken vil imidlertid ikke oppdage alle bakteriene tilstede, men bare de som er i stand til å vokse under de miljømessige forhold som standardsåget agar blir utsatt for..

I denne forstand søker platerkvantifiseringsteknikken generelt å bestemme mengden av aerobe mesofile bakterier, det vil si de som utvikler seg ved temperaturer mellom 25 og 40 ° C, med en optimal veksttemperatur ved 37 ° C.

Denne bakteriegruppen er svært viktig, fordi det er de fleste av de patogene bakteriene for mennesker.

Det skal bemerkes at det noen ganger kan være interessant å kvantifisere mengden psykofile bakterier som er tilstede i maten. Disse bakteriene er de som utvikler seg ved lave temperaturer (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

På samme måte kan termofile bakterier, som utvikler seg i området mellom 50 ° C og 80 ° C eller mer, være viktige i visse typer matvarer som hermetisert.

Mikrobiell kvantifisering uttrykkes i kolonidannende enheter (CFU) per gram eller milliliter av prøven.

index

• 1 Foundation
• 2 Fremstilling
  • 2.1 For platehelleteknikken
  • 2.2 For overflateplanting
• 3 Bruk
  • 3.1 Plate pouring teknikk (frøet av dybde)
  • 3.2 Teknikk sådd på overflaten
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 begrensninger
• 6 Referanser

fundament

Standard tellermediet er utformet for å muliggjøre en tilfredsstillende utvikling av ikke-krevende aerobiske bakterier, siden gjærekstrakt, triphein og glukose gir de nødvendige næringsstoffene for god mikrobiel utvikling.

På den annen side har mediet en klar farge og et gjennomsiktig utseende, og det er derfor det er ideelt for å vise koloniene utviklet ved metoden for dypsåing (pouring into a plate).

Det er også mulig å telle kolonier ved metoden for såing på overflaten med en spatel av Drigalski.

Når den mikrobielle belastningen er høy, må desimalfortynninger av prøven under studien foretas for å telle CFUene.

Det bør bemerkes at dette mediet er anbefalt av American Public Health Association (APHA) for telling av aerob mesofiler.

forberedelse

Veid 23,5 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. For å oppnå fullstendig oppløsning må blandingen oppvarmes omrøres ofte til den kokes. De følgende trinnene er avhengig av såingsteknikken som skal brukes.

Til platehelleteknikken

Fordel ved å dispensere 12 til 15 ml i reagensrør. Deretter steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Tillat å størkne vertikalt i form av en blokk. Oppbevares i kjøleskap til bruk.

Smelte køen når den skal brukes. Når det er smeltet, hold det i et vannbad ved 44-47 ° C mens prøver fremstilles.

For planting på overflaten

Steriliser mediet i en autoklav ved 121 ° C og fordel deretter 20 ml i sterile petriskål. Tillat å størkne, invertere og lagre i kjøleskap til bruk.

Varm platene før bruk. PH i mediet bør være 7,0 ± 0,2.

bruk

Agarstandardtallet brukes i den aerobiske mesofiltallteknikken under mikrobiologisk analyse av vann og mat. Telling av aerob mesofiler er nødvendig, da det bestemmer prøvens hygienekvalitet under studien.

Anvendelsen av denne teknikken (ved bruk av dette medium) tillater makroskopisk visualisering av isolerte kolonier for deres kvantifisering.

Plaque pouring teknikk (frøet av dybde)

-prosessen

Teknikken består av følgende:

1) Homogeniser prøven for å omfordele bakteriene tilstede.

2) En opprinnelig suspensjon utføres i et sterilt hetteglass eller en pose med respekt for forholdet 10 g eller 10 ml prøve i 90 ml fortynningsmiddel (10^-1).

3) Fra den opprinnelige suspensjonen blir de relevante desimalfortynninger gjort avhengig av type prøve. Eks: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Fortynningene er laget med peptonvann eller fosfatbuffer.

For å gjøre dette, ta 1 ml av den opprinnelige suspensjonen og sett i 9 ml fortynningsmiddel, fortsett fortynningen hvis nødvendig, og ta nå 1 ml fortynning.^-2 og så videre.

4) Ta 1 ml av hver fortynning og sett i tomme, sterile petriskål.

5) Legg til hver plate 12 til 15 ml standard telleagar, som tidligere ble smeltet og satt til 44 - 47 ° C.

6) Gi jevne rotasjonsbevegelser til platene for å fordele prøven til agaren jevnt og la det størkne.

7) Omvendte plater og inkuber ved 37 ° C i aerobiosi i 24 til 48 timer.

8) Når tiden er ferdig, fortsett å undersøke platene og telle koloniene i fortynningen som tillater det. Det er valgt for å telle de platene som har mellom 30 og 300 CFU.

Tellingen kan gjøres manuelt, eller koloni-tellerutstyret kan brukes.

De tillatte verdiene per ml prøve kan variere fra land til land i henhold til de standarder de styres av.

-Beregning av UFC

Den generelle beregningen er laget ved å bruke følgende formel:

Skriv resultatene i 1 eller 2 siffer, multipliser med riktig base 10. Eksempel: hvis resultatet er 16.545, er det avrundet basert på det tredje sifferet til 17.000 og vil bli uttrykt som følger: 1,7 x 10⁴. Nå, hvis resultatet var 16.436 er avrundet til 16.000 og uttrykkes 1,6 x 10⁴.

Teknikk plantet på overflaten

-prosessen

-Inokuler med 0,1 ml av den direkte prøve hvis den er flytende, opprinnelig suspensjon 10^-1 eller konsekutive fortynninger 10^-2, 10^-3 etc, i midten av en standard konto agar plate.

-Fordel prøven jevnt med Drigalski spatel eller L-formet glassstang. La stå i 10 minutter.

-Omvendte plater og inkuber i aerobiosis ved 37 ° C i 24 til 48 timer.

-Fortsett å telle koloniene, velg de platene som ligger i området mellom 20 - 250 CFU.

-Beregning av UFC

For beregningen blir fortynningsfaktoren påført, som er den inverse. Tallet er avrundet til 2 signifikante siffer (avrunding i henhold til det tredje sifferet) og uttrykkes i basis 10-effekt. For eksempel, hvis 224 CFU telles i prøven uten fortynning (10^-1), Er 22 x 10 rapportert¹  UFC, men hvis tallet var 225, er det rapportert 23 x 10¹ UFC.

Nå, hvis du teller 199 CFU i fortynning 10^-3, 20 x 10 vil bli rapportert⁴ UFC, men hvis 153 CFU teller i samme fortynning, vil 15 x 10 bli rapportert⁴ UFC.

Kvalitetskontroll

Standardtallkulturmediet kan evalueres ved bruk av kjente sertifiserte stammer, slik som: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Hvis kulturmediet er i optimale forhold, forventes tilfredsstillende vekst i alle tilfeller, bortsett fra L. fermentum som kan ha en vanlig ytelse.

For å vurdere steriliteten av dyrkningsmediet bør en eller to plater av hver preparert sats (ikke-injisert) inkuberes ved 37 ° C i aerobiosi i 24 timer. På slutten av denne tiden bør ingen vekst eller fargeendring av mediet observeres..

begrensninger

-Ikke smeltet agar mer enn en gang.

-Det tilberedte mediet kan vare opptil 3 måneder så lenge det holdes i kjøleskap og beskyttes mot lys.

-Dette mediet er ikke egnet for krevende mikroorganismer eller anaerober.

referanser

1. Nasjonal administrasjon av medisiner mat og medisinsk teknologi (ANMAT). Mikrobiologisk analyse av mat, offisiell analytisk metode, indikatormikroorganismer. 2014 Volum 3. Tilgjengelig på: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plate Count Agar. 2009. Tilgjengelig på: http://f-soria.es
3. Laboratorier Conda Pronadisa. Agar for standardmetoder (PCA) i henhold til APHA og ISO 4833. Tilgjengelig på: condalab.com
4. Laboratorier Britania. Telling på agarplate. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. 2009. Teknikker for mikrobiologisk analyse av matvarer. 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico. Tilgjengelig på: depa.fquim.unam