Agar EMB grunnlag, forberedelse og bruk



den EMB agar er et selektivt og differensielt fast kulturmedium som brukes til isolering av Gram-negative baciller, hovedsakelig av Enterobacteriaceae-familien, og andre ikke-krevende Gram-negative baciller. Det er også kjent med akronymet EAM, som betyr eosin-metylenblå.

Dette mediet ble skapt av Holt-Harris og Teague i 1916. Det inneholder pepton, laktose, sukrose, dikaliumfosfat, agar, eosin, metylenblå og vann. Det ligner på MacConkey agar, spesielt hvis man bruker EMB-agar modifisert av Levine, som ikke inneholder sukrose.

Faktisk bestemmer hvert laboratorium om det virker med den ene eller den andre siden de oppfyller den samme funksjonen, selv om de biokjemisk er forskjellige.

Den gir også den samme ulempen som den klassiske MacConkey agaren i form av swarming produksjon av slekten Proteus. For å unngå dette fenomenet kan du derfor øke konsentrasjonen av agar opp til 5%.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Selektiv
    • 1.2 Differensial
  • 2 Fremstilling
  • 3 bruksområder
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Endelige hensyn
  • 6 Referanser

fundament

selektiv

EMB-agar er diskret selektiv fordi den inneholder anilinic fargestoffer (eosin-metylenblått), som virker som inhibitorer, hindrer vekst av de fleste Gram-positive bakterier og noen gramnegative bakterier krevende.

Imidlertid har denne agar ulempen at noen Gram-positive bakterier kan motstå tilstedeværelsen av de hemmende substansene og vokse som små fargeløse punktlignende kolonier, slik som Enterococcus faecalis og noen Staphylococcus.

Du kan også vokse visse gjær, som for eksempel Candida albicans kompleks, Det vil gi svært små rosa kolonier. Selv klamydosporer kan utvikles fra denne gjær hvis prøven blir sådd på dybden.

differensial

Dessuten er det EMB-agar også en differensial medium, ettersom disse fargestoffer sammen (eosin metylenblått) har den egenskap at de danner et bunnfall i sur pH-verdi, således at de tjener som indikatorer for produksjon av disse.

Derfor produserer svakt gjærende laktose- eller sukrosebakterier lilla kolonier i 24 til 48 timer. For eksempel släktet Klebsiella, Enterobacter og Serratia.

De bakteriene som sterkt fermenterer laktose, som f.eks Escherichia coli, eller sukrose, som Yersinia enterocolitica eller Proteus penneri, danner et grønt svart bunnfall, noe som gir en metallisk skinnkarakteristikk i disse artene.

Det skal bemerkes at hvis EMB levinmediet brukes (uten sukrose), Yersinia enterocolitica og Proteus penneri de vil produsere gjennomsiktige kolonier.

Bakterier ikke fermentere laktose eller sukrose mates ved tilstedeværelse av peptoner, som gir aminosyrer og nitrogen for bakterievekst, og fremstille transparente kolonier. For eksempel, Salmonella og Shigella-generaen, blant andre.

Det er også viktig å merke seg at slekten Acinetobacter kan ha lavendel blå kolonier, selv om det ikke fermentatorvekst laktose eller sukrose, men har den egenskap at innfesting av metylenblått i deres cellevegg. Dette kan også skje med andre oksidative bakterier.

forberedelse

Det opprinnelige dehydrerte mediet er lys beige.

For å forberede dette kultursmediet, bør 36 gram av dehydratiserte medium veies og suspenderes i et hetteglass som inneholder en liter destillert vann.

Etter å ha forlatt blandingen i 5 minutter i hvile, ta fiolaen til en varmekilde, bland den kraftig og konstant til den kokker og den er helt oppløst..

Deretter må det oppløste dyrkningsmediet steriliseres ved bruk av autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

På slutten av tiden fjernes den fra autoklaven og lar seg hvile kort. Deretter serveres det til og med varmt (45 - 50 ° C) mellom 15 til 20 ml agar i hver steril petriskål. Mediet skal være blå litmus.

Etter servering blir platene litt avdekket til agaret kjøler litt. Da de er dekket og tillatt å størkne helt. Senere bestilles de i en invertert plakkholder og oppbevares i kjøleskap (8 ° C) til de brukes.

Denne prosedyren utføres fortrinnsvis i en laminarflytende hette eller foran Bunsen-brenneren for å unngå forurensning.

Det er viktig å huske på at hvert kommersielt hus vil indikere mengden som skal veies for å forberede kulturmediet.

Den endelige pH i mediet bør være 7,2 ± 0,2

søknader

Dette mediet blir brukt for å så urin og avføring eller noen form for kliniske prøver, spesielt hvis man har mistanke om tilstedeværelse av lite krevende gramnegative bakterier, slik som bacilli som tilhører familien Enterobacteriaceae, som vokser meget godt i dette mediet.

De enteropathogene bakteriene av slægten Shigella og Salmonella utmerker seg ved deres fargeløse eller litt gule kolonier.

Andre ikke-fermenterende laktosebaciller vokser også, blant annet Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Dessuten er dette medium meget brukbare ved mikrobiologiske analyser av mat og vann, er det ideelt for fullstendig fase bekreftende bestemmelse av koliforme bakterier, det vil si, for å bekrefte tilstedeværelse av E. coli fra uklare EC-buljonger, fra den mest sannsynlige tallteknikken (NMP).

Kvalitetskontroll

For å verifisere at det nylig dyrkede dyrkingsmediet fungerer bra, kan kontrollstammer plantes for å observere egenskapene til koloniene og verifisere at de gir som forventet.

For dette, ATCC stammer eller velkjente stammer av E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa og noen gram-positive bakterier, som S. aureus.

Det forventes at E. coli Generer velutviklede, blåaktig-svarte kolonier med grønn metallisk glans. Så lenge som, Enterobacter aerogenes og Klebsiella sp de må gi velutviklede slimete kolonier blåaktig-svart.

For sin del, Salmonella typhimurium og Shigella flexneri, de må utvikle store kolonier, fargeløse eller med en liten gul farge.

Endelig sjangeren Pseudomonas aeruginosa det vokser som fargeløse kolonier av uregelmessig størrelse, mens Gram-positive bakterier skal heves helt eller vokse sparsomt med svært små kolonier.

Endelige hensyn

Noen ganger forårsaker steriliseringen metylenblåen å redusere, observere et oransje medium. For at metylenblåen skal oksyderes og den lilla fargen skal gjenopprettes, må den blandes forsiktig til fargene gjenoppretter.

Etter at steriliseringen kan utfelle fargestoffet, må det også blandes godt før du serverer petriskålene.

referanser

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. 2009. Teknikker for mikrobiologisk analyse av matvarer. 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisering og distribusjon av stammer av Escherichia coli Potentielt patogene isolater av kyllingbroiler fra fjærfe gårder i Peru. Rev. undersøkelse. veterinæren. Peru 2012 23 (2): 209-219. Tilgjengelig på: scielo.org.
  3. Laboratorier Conda S.A. Eosin Agar og Methylen Blue. 2010. Tilgjengelig på: condalab.com
  4. Laboratorier Britania. Levine E.M.B (Med Eosin og Methylenblå) 2011. Tilgjengelig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylen Blue Agar), Modified. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial