Agar Endo grunnlag, forberedelse og bruk



den Endo-agar eller medium Endo er et solid, differensialkulturmedium med en viss grad av selektivitet. Den opprinnelige formelen ble opprettet av Endo i 1904 for å skille laktosefermenterende bakterier fra ikke-fermenterende bakterier. I begynnelsen ble det laget for isolering av Salmonella typhi, men senere vendte målet om mediet til søket etter coliforms.

Prinsippet om Endo-agar har blitt opprettholdt, men formuleringen har gjennomgått utallige endringer gjennom årene. Foreløpig er mediet sammensatt av peptid fordøyd animalsk vev, laktose, dikaliumhydrogenfosfat, natriumsulfitt, basisk fuksin og agar.

Hovedbruk av mediet har vært knyttet til isolasjon og differensiering av gramnegative baciller som tilhører familien Enterobacteriaceae og til andre familier i nærheten..

I lang tid ble det brukt i deteksjon av coliforms i vann-, melke- og matprøver, men i dag har bruken av dette mediet blitt forskjøvet av andre med lignende funksjoner. Imidlertid bruker noen mikrobiologi laboratorier denne agar for isolering av Enterobacteriaceae fra prøver av klinisk opprinnelse.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Variant av agar m-Endo
  • 3 Bruk
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 begrensninger
  • 6 Referanser

fundament

Endo-agar inneholder peptoner som tjener som kilden til aminosyrer, nitrogen, karbon og energi, som er nødvendige for veksten av uønskede mikroorganismer.

På den annen side er det litt selektive karakter av agaren tilveiebragt ved tilsetning av natriumsulfitt og basisk fuchsin; Begge komponentene hemmer delvis eller helt utviklingen av de fleste Gram-positive bakterier.

Differensialkarakteren er gitt ved tilstedeværelse av gjærbar karbohydrat, som i dette tilfellet er laktose og grunnleggende fuchsin, som også tjener som indikator for pH.

Gram-negative bakterier som vokser på denne agar og er i stand til å gjære laktose vil danne sterke rosa kolonier; å være patognomonic of Escherichia coli dannelsen av mørke røde kolonier med en grønn metallisk glans iriserende. Dette skyldes den høye produksjonen av syrer fra fermentering av karbohydrater.

Det skal bemerkes at mediet som er rundt koloniene, også vender seg til en sterk rosa farge. Mens ikke-fermenterende gram-negative baciller av laktose danner blekrosa kolonier som ligner medium eller fargeløs.

Dipaliumhydrogenfosfat balanserer pH i mediet og agar er komponenten som gir den faste konsistensen.

forberedelse

Endo Agar

Veid 41,5 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Varm blandingen ved å omrøre ofte til det er totalt oppløsning av mediet. Steriliser i autoklav ved 121 ° C, ved 15 lb trykk, i 15 minutter.

Når du fjerner fra autoklaven, la den kjøle seg til en temperatur på ca. 45-50 ° C, rist blandingen for å homogenisere før servering. Hell 20 ml i sterile petriskål.

La platene størkne, invertere og oppbevare i en eske eller pakke med mørkt papir før det oppbevares i kjøleskap. Det er svært viktig å beskytte preparert medium fra direkte lys. En anbefalte praksis er å forberede det nøyaktige beløpet som skal trengs.

Ved oppbevaring i kjøleskap skal platene varmes før bruk.

PH i mediet bør være mellom 7,2 og 7,6 og fargen på det fremstilte medium er blekrosa..

Variant agar m-Endo

Det er en annen versjon av Endo-agar (m-Endo) som følger formelen av McCarthy, Delaney og Grasso, som inneholder flere forbindelser og varierer i ferd med å bli forberedt..

Denne varianten inneholder: laktose tryptose, spaltet enzymatisk spaltet casein enzym av animalsk vev, natrium-, kalium- hydrogenfosfat, natriumsulfitt, gjærekstrakt, monobasisk kaliumfosfat, basisk fuksin, natriumdeoksycholat klorid, sulfat av natrium og agar.

I dette tilfellet veier vi 51 g av dehydratiserte medium og suspenderer det i 1 liter destillert vann som inneholder 20 ml etanol.

Varm litt under omrøring til mediet er fullstendig oppløst. Ikke overopphet og steriliser ikke i en autoklav. Når blandingen er homogen, server den i sterile petriskål og la det størkne.

bruk

I noen land er det fortsatt brukt til telling av totalt og fecale koliformer i vann- og matprøver, særlig tilstedeværelsen av Escherichia coli som hovedindikator for fekal forurensning.

M-Endo Agar er anbefalt av American Public Health Association (APHA) for overvåkings- og kontrollprogrammer desinfeksjon og rensing av avløpsvann, samt i å vurdere kvaliteten på drikkevannet.

Den mest brukte metoden er membranfiltrering, etter anrikning av prøven med Laurylsulfatbuljong i 2 til 4 timer.

Den kan også brukes som en erstatning for EMB-agar i mikrobiologisk analyse av mat og vann for de mest sannsynlige antall-teknikken (NMP), spesielt i den fullstendige fase bekreftende for å bekrefte tilstedeværelsen av E. coli fra uklare EC buljonger.

Kvalitetskontroll

For å evaluere kvaliteten på den forberedte Endo-agar-batchen, blir såkjente eller sertifiserte kontrollstammer sådd.

Blant de stammene som kan brukes til dette formålet er: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 og Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Stammene blir sådd ved utmattelse og inkubert ved 37 ° C i 24 timer i aerobiosis.

De forventede resultatene er:

  • til Escherichia coli: kolonier sterkt rød, med metallisk glans.
  • til E. cloacae og K. pneumoniae koloniene bør være rosa mucoid.
  • I tilfelle av S. typhimurium, S. flexneri og P. mirabilis koloniene er vanligvis blekrosa eller fargeløse.
  • endelig, E. faecalis Det forventes å være delvis hemmet, derfor bør veksten være dårlig med svært små kolonier med sterk rosa.

begrensninger

-Endo-mediet har lav selektiv kraft, derfor er det mulig at noen Gram-positive mikroorganismer som Staphylococcus, Enterococcus og jevn gjær kan vokse.

-Andre baciller som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, kan utvikle seg i dette mediet, som for eksempel Pseudomonas sp og Aeromonas sp. Egenskapene til disse stammene er fargeløse uregelmessige kolonier.

-Dette preparerte medium er svært følsomt for lys, derfor forverres en langvarig eksponering for dette indikatorsystemet, irreversibelt skadet mediet.

-Komponentene i mediet anses som kreftfremkallende, derfor bør direkte kontakt unngås.

-Det dehydrerte mediet er veldig hygroskopisk og bør oppbevares i sin opprinnelige beholder ved romtemperatur, tett lukket og i tørt miljø.

referanser

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, Den frie encyklopedi. 7. september 2017, 08:27 UTC. 28. februar 2019, 22:55. Tilgjengelig på: en.wikipedia.
  4. MercK laboratorium. Endo-agar 2019. Tilgjengelig på: merckmillipore.com
  5. Laboratories Technical Sheet. M-Endo Agar LES. 2015. Tilgjengelig på: liofilchem.net