Dele:
Agar Hektoen grunnlag, forberedelse og bruk
den Hektoen agar eller enterisk Hektoen agar er et fast, selektivt og differensialkulturmedium. Det ble opprettet på Hektoen-instituttet av King og Metzger for isolering av enteropatogene bakterier av slægten Shigella og Salmonella..
Mediet består av proteose pepton, gjærekstrakt, gallesalter, laktose, sukrose, salicin, natriumtiosulfat, natriumklorid, jern citrat, ammonium citrat, bromtymolblått, syrefuksin og agar. Denne formuleringen gjør det mulig å skille genera Shigella og Salmonella fra resten av bakteriene som er i stand til å vokse i dette mediumet.
Selv om det finnes andre midler med samme funksjon som Hektoen agar, gir dette større fordel sammenlignet med andre virkemidler, spesielt når du vil gjenopprette Shigella-arter.
Arter av begge slægter produserer alvorlige gastrointestinale problemer hos mennesker på grunn av forbruk av forurenset mat; derfor er overføringen fekal - muntlig. Derfor er bruken av Hektoen agar hovedsakelig indikert i den mikrobiologiske analysen av avføring og matprøver..
index
- 1 Foundation
- 2 Fremstilling
- 3 Bruk
- 4 Kvalitetskontroll
- 5 begrensninger
- 6 Referanser
fundament
Hektoen agar inneholder peptoner og gjærekstrakt som en kilde til næringsstoffer, og gir de essensielle elementene for mikrobiell utvikling.
Det har imidlertid også gallsalter som virker ved å hemme veksten av noen bakterier, spesielt Gram-positive og noen Gram-negative. Det er av denne grunn at det regnes som et selektivt medium.
På den annen side er Hektoen agar et differensielt medium. Denne egenskapen er tildelt ved tilstedeværelse av fermenterbare karbohydrater som laktose, sakkarora og salicin, sammen med pH-indikatorsystemet, representert ved bromtymolblått og syrefuchsin..
Alle bakterier som er i stand til å vokse i dette mediet som ikke tilhører slekten Salmonella og Shigella, vil utvikle laks eller oransje kolonier med unntak av slekten Proteus. Dette skyldes gjæring av en eller flere av de karbohydrater som er til stede, som surgjerer mediet, noe som får pH-indikatoren til å snu.
I mellomtiden, slekten Shigella og Salmonella er ikke i stand til å fermentere karbohydrater eventuelle tilstedeværende, ved hjelp av bare peptoner som en energikilde, som gjøres alkalisk medium, og derfor dens kolonier er grønn-blå.
Også i dette mediumet kan man skille bakterier som er i stand til å danne hydrogensulfid (fargeløs gass). Natriumtiosulfat virker som en kilde til svovel mens jerncitrat er avslørende middel. Begge forbindelser muliggjør dannelsen av et svart utfelling av jernsulfid som påviser reaksjonen.
Det svarte fallet i sentrum av kolonien med en gjennomsiktig halo rundt gir et fiskøyeutseende. Denne egenskapen antyder tilstedeværelsen av slekten Salmonella.
Endelig opprettholder natriumklorid den osmotiske balansen og agar gir den faste konsistensen til mediet.
forberedelse
Veie 76 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Rist blandingen kraftig og la den hvile i 10 til 15 minutter. Det kan varmes opp og kokes, og gir roterende bevegelser til total oppløsning. Dette mediet er ikke autoklavert.
Når mediet når en temperatur på ca. 45 ° C, helles et volum på 20 ml direkte i sterile petriskål..
Agar får stivne. På den tiden er de klare til bruk. Det er tilrådelig å bruke dem umiddelbart. Hvis de ikke er mulige, bør de oppbevares i kjøleskap til de brukes.
Plattene bør fjernes tidlig fra kjøleskapet før de plantes for å ta romtemperatur.
PH i mediet bør være 7,5 ± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er lilla og preparert er brungrønn.
bruk
Bruken av Hektoen agar anbefales for søket etter bakterier av slekten Shigella og Salmonella i avføring og matprøver..
Muligheten for å isolere disse bakteriene øker kraftig dersom prøven tidligere er beriget i spesielle buljonger, så som selenittbuljong, selenittcystebutin, tetrathionatbuljong, etc..
Inokulumet må være sterkt og såningen utføres ved strikking. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiosis.
Inkubasjon anbefales i 48 timer fordi karakteristikkene til koloniene er tydeligere for deres tolkning og differensiering på dette tidspunktet.
Kvalitetskontroll
For å utføre kvalitetskontroll på dette mediet, brukes sertifiserte bakteriestammer, for eksempel: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 og Shigella sonnei ATCC 25931.
De forventede resultatene er følgende: Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis De må utvikle grønnblå kolonier med eller uten et svart senter. Mens Shigella-artene vil vokse som blågrønne kolonier.
Du kan også inkludere stammer av Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.
I disse tilfellene er de observerte egenskapene følgende: E. coli og K. pneumoniae I dette mediumet vil de utvikle laks-til-oransje kolonier, med et bunnfall av samme farge rundt dem. I mellomtiden vil Proteus utvikle blågrønne kolonier med eller uten et svart senter.
mens S. aureus og E. faecalis bør heves, noen ganger E. faecalis klarer å vokse som gule kolonier, veldig små.
På den annen side, fordi dette mediet ikke steriliseres i en autoklav, er det viktig å vurdere steriliteten til mediet. Derfor bør hver batch som fremstilles inkuberes en til to plater uten å inokulere ved 37 ° C i 24 timer i aerobiosis.
Det er åpenbart at det ikke er noen vekst av noe slag på platen.
begrensninger
-Proteusarter kan utvikle seg i dette miljøet og egenskapene til deres kolonier kan forveksles med Salmonella- eller Shigella-arter. Av denne grunn må enhver mistenkelig koloni bekreftes med biokjemiske tester.
-Det er nødvendig å følge bruken av dette mediet med andre mindre selektive agar, fordi hvis den ønskede mikroorganismen er funnet i lave konsentrasjoner, kan den ikke utvikles i dette mediumet.
-Ikke overopphet under forberedelsen, da for høy varme endrer sammensetningen av mediet.
-Uvanlig laktose-fermenterende Salmonella kolonier kan virke ubemerket.
referanser
- Wikipedia bidragsytere. Hektoen enterisk agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. mars 2019, 23:38 UTC. Tilgjengelig på: .wikipedia.org / Tilgang 16. mars 2019.
- BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tilgjengelig på: bd.com
- Laboratorier Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Tilgjengelig på: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. Andre utgave. Tilgjengelig på: bd.com/europe