Agar LIA (Lysine Iron) grunnlaget, forberedelse og bruk



den LIA agar (Lysine Iron) er en biokjemisk test som brukes til å identifisere bakterier av familien Enterobacteriaceae. Dette mediet ble skapt av Edwards og Fife, basert på Falkows formel.

Opprinnelig var denne testen en buljong som inneholdt peptoner, gjærekstrakt, glukose, L-lysin, bromokresolpurpur og destillert vann. Edwards og Fife tilsatt agar-agar, ferriammoniumcitrat og natriumtiosulfat.

Prøven består i hovedsak av å demonstrere tilstedeværelsen av enzymet lysin-dekarboksylase, som er i stand til å reagere med karboksylgruppen av aminosyren L-lysin. En deaminering av aminosyren kan også oppstå på grunn av tilstedeværelsen av enzymet lysin deaminase.

I tillegg tillater mediets sammensetning å demonstrere kapasiteten til noen bakteriell slægter til å produsere hydrogensulfid. Endelig er det også mulig å observere generasjonen eller ikke av gass i midten.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Peptoner og gjærekstrakt
    • 1,2 Glukose
    • 1,3 L-lysin
    • 1,4 pH-indikator (bromokresol lilla)
    • 1,5 Ammonium ferriscitrat og natriumtiosulfat
  • 2 Tolkning av testen
    • 2.1 Dekarboksylering av lysin
    • 2.2 Deaminering av lysin
    • 2.3 Produksjon av hydrogensulfid (H2S)
  • 3 Opptak av resultater
  • 4 Fremstilling
  • 5 bruksområder
  • 6 Referanser

fundament

Peptoner og gjærekstrakt

Som de fleste kulturmedier inneholder jernlysinagar komponenter som gir kilden til næringsstoffer som er nødvendige for bakteriell vekst. Disse komponentene er representert av peptoner og gjærekstrakt.

glukose

Også denne agar inneholder gjærbar karbohydratglukose. Det er kjent at alle bakterier av familien Enterobacteriaceae fermenterer glukose.

Dette trinnet er avgjørende, fordi det vil være ansvarlig for surgjøring av mediet, en viktig betingelse for enzymet lysin-dekarboksylase, hvis det er til stede, for å virke på dets substrat.

I noen bakterielle slanger kan gassproduksjonen på grunn av fermentering av glukose observeres.

Gassen er bevist når det er en forskyvning av agar i røret, og etterlater et tomrom i bunnen av røret eller ved å bryte mediet i to eller flere deler.

L-lysin

Når lysinet er dekarboksylert, dannes en diamin (cadaverin) og karbondioksid.

Dekarboksylering skjer i nærvær av koenzymet pyridoksalfosfat. Denne reaksjonen er irreversibel.

PH indikator (bromokresol lilla)

Alle endringer av pH oppstod i mediet ved de forskjellige reaksjonene, detekteres av bromokresol-lilla pH-indikatoren.

I denne forstand, når det er surgjøring, blir mediet gult, og når det er alkalisering, går mediet tilbake til den opprinnelige lilla eller lilla farge.

Når deaminering av lysin oppstår ved tilstedeværelsen av enzymet lysin deaminase, en rødaktig farge former på overflaten, typisk i slægten Proteus, Providencia og noen arter av Morganella.

Dette skyldes det faktum at i løpet av deamineringsprosessen dannes alfa-keto-karbonsyre som reagerer med ammoniumcitrat i nærvær av oksygen, noe som forårsaker den nevnte farge.

Ammonium ferriscitrat og natriumtiosulfat

På den annen side vil bakteriene som produserer hydrogensulfid bli påvist ved tilstedeværelsen av natriumtiosulfat (kilde til svovel) og ferriammoniumcitrat, som er utvikler av H2S.

Bakterier som besitter tiosulfatreduktaseenzym har evnen til å virke ved å redusere den foreliggende natriumtiosulfat, danner sulfitt og hydrogensulfid (H2S).

Sistnevnte er en fargeløs gass, men når den reagerer med jernsaltet, dannes metallisk jernsulfid, som er en uoppløselig forbindelse (synlig svart utfelling).

Imidlertid kapasiteten til H-formasjonen2S med dette mediet er ikke veldig pålitelig, fordi noen negative lysin-dekarboksylase bakterier som er i stand til å produsere H2S vil ikke danne det svarte bunnfallet, fordi surheten av mediet forstyrrer. Derfor anbefales det å sjekke med andre midler som inneholder jern.

Tolkning av testen

Dekarboksylering av lysin

Rørene bør leses etter slutten av 24 timers inkubasjon, ellers er det fare for feilfortolkning av reaksjonen, rapportering av falske negativer.

Det må huskes at den første reaksjonen som vil oppstå, vil være gisingen av glukosen, derfor vil alle rørene etter 10 til 12 timer bli gult.

Hvis en gult bakgrunn med en lilla eller lilla overflate er observert på slutten av inkubasjonsperioden (24 timer), er reaksjonen negativ. Den lilla farge av overflaten tilsvarer alkalisering av mediet ved bruk av peptoner.

En positiv reaksjon er en der bunnen og overflaten av røret er helt lilla, det vil si at den vender tilbake til den opprinnelige fargen.

Derfor, hvem bestemmer testens positivitet, er basen eller bunnen av mediet. Hvis du er i tvil om fargen, kan du sammenligne den med et ikke-inokulert LIA-rør.

Deaminering av lysin

Et rør som viser deaminering av lysin, vil ha en rødbrun overflate og en gul bakgrunn (syre) eller hele rødbrunrøret..

Denne reaksjon tolkes som negativ for dekarboksyleringen av lysin, men positiv for deaminering av lysin.

Denne reaksjonen er definert og tolket i skråningen.

Produksjon av hydrogensulfid (H2S)

En positiv reaksjon observeres ved utseendet av et svart bunnfall i hele eller deler av mediet. Vanligvis mellom skrågrensen og basen.

Hvis bunnfallet forekommer i hele røret, vil det ikke vise de andre reaksjonene som oppstår i mediet.

Opptak av resultatene

Ved tolkning av testen registreres resultatene som følger:

Først les avkanten, så bunnen eller taco, så produksjonen av H2S, og til slutt gassproduksjon.

Eksempel: K / A + (-). Dette betyr:

  • K: Alkalisk bezel (lilla)
  • A: Acid (gul) bakgrunn, det vil si negativ dekarboksyleringsreaksjon og negativ deaminering.
  • +: Produksjon av hydrogensulfid
  • (-): Uten gass.

forberedelse

Veid 35 g av lysinagardehydratjern og oppløs i 1 liter destillert vann.

Varm opp til agar er fullstendig oppløst, så kok det i et øyeblikk, omrøring ofte. Fordel 4 ml mediet i 13/100 reagensrør med bomullsdeksel.

Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la det ligge på en skrå måte, slik at det er en dyp base og en kort kant.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. Tillat å temperere før planting av bakteriestammen.

Fargen på det dehydrerte mediet er beige og mediet tilberedt rødlig lilla farge.

Den endelige pH av det fremstilte medium er 6,7 ± 0,2.

Mediet blir gul med pH lik eller mindre enn 5,2 og lilla ved pH 6,5 opp.

søknader

Denne testen, sammen med andre biokjemiske tester, brukes til å identifisere baciller fra familien Enterobacteriaceae..

Mediet er sådd med en straight sløyfe eller en nål, en eller to slag er laget til bunnen av røret, og så er overflaten av mediet sikret.

Den inkuberes i 24 timer ved 35-37 ° C i aerobiosis. Om nødvendig blir det igjen inkubering i 24 timer mer.

Det er hovedsakelig nyttig å skille Negative Citrobacter Lactose arter fra Salmonellas sp.

referanser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorier Britania. Lysin jern agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Tilgjengelig på: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Tilgjengelig på: andinamedica.com