Agar M.R.S grunnlag, forberedelse og bruk



den agar M.R.S. er et selektivt fast dyrkningsmedium, anvendt for isolering og telling av melkesyrebakterier, spesielt av slekten Lactobacillus. Denne agar ble opprettet i 1960 av Man, Rogosa og Sharpe, den midterste peiling samme navn, men på grunn av sin kompleksitet brukes forkortelsen M.R.S ofte..

Det er sammensatt av proteose pepton, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, glukose, sorbitanmonooleat, dikaliumfosfat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar.

Denne sammensetningen muliggjør riktig utvikling av melkesyrebakterier fra kliniske prøver, som feces, vaginal sekresjon, oral prøver og brystmelk, samt meieri og kjøttpålegg..

Det brukes ikke rutinemessig i kliniske laboratorier, fordi melkesyrebakterier sjelden er involvert i patologiske prosesser. Imidlertid er bruken av M.R.S agar hyppigere innen matmikrobiologi..

På den annen side brukes dette mediet av enkelte forsknings-sentre hvis mål er studiet av melkesyrebakterier.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Karakteristikker av koloniene
    • 3.2 Isolering av melkesyrebakterier
    • 3.3 Telling av melkesyrebakterier
    • 3.4 På forskningsnivå
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referanser

fundament

Agar Man, Rogosa og Sharpe har en ganske kompleks sammensetning. Ved å bryte ned funksjonen som hver av komponentene oppfyller, kan grunnlaget forklares.

Proteosepepton, kjøttekstrakt, gjærekstrakt og glukose er næringsstoffer som gir kilden til karbon, nitrogen, vitaminer og mineraler som er nødvendige for bakteriell vekst. I tillegg er glukose den universelle energikilden som brukes i de fleste kulturmedier.

På den annen side, for å favorisere veksten av melkesyrebakterier, er tilstedeværelsen av uunnværlige kofaktorer (kationer) i metabolisme av Lactobacillus og beslektede bakterier nødvendig; Disse forbindelsene er natrium-, magnesium- og mangansalter.

På samme måte er sorbitanmonoleat eller polysorbat 80 en kilde til viktige fettsyrer når de absorberes som næringsstoffer.

I tillegg virker sorbitanmonoleat og ammoniumcitrat ved å hemme utviklingen av den medfølgende flora, spesielt gramnegative bakterier, som gir selektiv karakter av denne agar.

Endelig er agar-agar det som gir den faste konsistensen til mediet.

Det finnes andre varianter av Man Rogosa Sharpe agar; man er supplert med cystein (M.R.S.c), nyttige for isolering bifidobakterier, blant andre mikroorganismer. Videre er det MRS-medium supplementert med neomycin, paromomycin, nalidiksinsyre og litiumklorid, spesielt for den selektive tellingen av bifidobakterier i meieriprodukter.

forberedelse

Veie 68,25 gram av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. La stå i 5 minutter. For å oppløse i sin helhet, ta til en varmekilde omrøring ofte og la koka i 1 til 2 minutter. Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Når du forlater autoklaven, la det stå noen minutter og distribuere fortsatt varmt i sterile petriskåler.

Tillat å størkne og invertere platene, bestille i plaquers og lagre i kjøleskapet til bruk. La platene ta romtemperatur før du bruker dem.

PH i mediet bør være 6,4 ± 0,2. Noen kommersielle hus anbefaler pH mellom 5,5 og 5,9.

Det dehydrerte mediet er beige og fremstilt er mørkt gult.

Både dehydratiserte medium og de fremstilte platene skal lagres ved 2 til 8 ° C.

søknader

Agarplatene M.R.S. de kan bli sådd på overflaten (utmattelse eller med en spatel av Drigalski). Det kan også bli sådd av dybde. Plater bør inkuberes ved 37 ° C i mikroerofil (4% O2 og 5-10% CO2) i 24 til 72 timer.

Såningsmetoden velges i henhold til formålet (isolering eller telling).

Karakteristikker av koloniene

De presumptive koloniene av Lactobacillus vokser whitish og har et mucoid eller kremaktig utseende på denne agar. Da må de identifisere.

Isolering av melkesyrebakterier

Til dette formål brukes plantingen ved overflaten. Prøver som skal plantes krever en tidligere prosedyre. 

Når det gjelder brystmelkprøver, anbefales det å centrifugere 1 ml av prøven ved 14 000 rmp i 10 minutter for å fjerne fettlaget. 900 μl kastes, og i de gjenværende 100 μl suspenderes sedimentet og helles på M.R.S. Deretter må den fordeles jevnt med en spatel av Drigalski.

I tilfelle av avføringprøver veies en (1) gram avføring og homogeniseres i 9 ml 0,1% sterilt peptonert vann, tilsvarende en 1/10 fortynning. Deretter blir serielle fortynninger gjort til en endelig fortynning på 10 er oppnådd-4.

Til slutt blir 100 ul fortynninger 10 tatt-2, 10-3 og 10-4 og hver fortynning blir podet på MRS agar, fordelt jevnt med en Drigalski-spatel.

Telling av melkesyrebakterier

I dette tilfellet er sådd gjort med dybde.

For prøver av morsmelk, ta 1 ml og legg den i et sterilt konisk plastrør. MRS agar tilsettes ved en temperatur på ca. 40 ° C opp til et sluttvolum på 25 ml, hvilket gir en homogen blanding. Deretter helles den i sterile petriskål på en jevn måte og får stå til den polymeriseres..

Fortynninger blir laget for avføringprøver, som beskrevet ovenfor. Ta 1 ml av hver fortynning og sett i sterile koniske plastrør. Smeltet MRS agar blir tilsatt til et volum på 25 ml.

Blandingen av hver fortynning helles jevnt i sterile petriskål. La det endelig stå til polymeriseringen.

På forskningsnivå

Hver dag blir studien av melkesyrebakterier mer interessant; spesielt forskere søker å kjenne nye stammer og deres potensial som å starte fermenter for standardisering i produksjon av meieriprodukter, blant annet bruksområder.

I denne forstand, Alvarado et al. (2007) brukte M.R.S. agar. å gjennomføre en studie hvor de isolerte, identifiserte og karakteriserte melkesyrebakterier tilstede i en håndtaksrøyk venezuelansk ost.

I ost fant de nærværet av bakterier av slektene Lactococcus og Lactobacillus, og konkluderte med at isolatene blandinger er egnet som start stammer i fremstillingen av ost fra pasteurisert melk.

På den annen side, Sánchez et al. (2017) brukte M.R.S agar. å undersøke tilstedeværelsen av melkesyrebakterier i fordøyelseskanalen hos grisene, for å bruke dem som innfødte probiotika som øker produktiviteten til sunne gris.

Med dette mediumet klarte de å isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae og Pediococcus pentosaceus.

På samme måte Báez et al. (2019) brukte M.R.S. agar. å evaluere melkesyrebakterier (BAL) og bifidobakterier med probiotisk potensial i morsmelk og avføring av spedbarn.

De klarte å isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp i morsmelk, og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. i avføring Alle møtte visse parametere som akkreditiverer dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Forfatterne konkluderte med at både brystmelk og avføring av utelukkende ammende spedbarn tjener som naturlige kilder til probiotiske bakterier.

Kvalitetskontroll

For å evaluere kvaliteten på M.R.S. kontrollstammer kan brukes som:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli og Bacillus cereus.

De forventede resultatene er tilfredsstillende vekst for de første 6 bakteriene, mens E. coli og Bacillus cereus må heves i sin helhet.

referanser

  1. Alvarado C, Chacon Z, Otoniel J, Guerrero B, Lopez G. isolering, identifisering og karakterisering av melkesyrebakterier i en ost venezuelansk Artisan Smoked Andino. Dens bruk som nybegynnerkultur. Ektiv. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tilgjengelig på: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering av melkesyrebakterier fra pigmentens fordøyelseskanal. Rev. undersøkelse. veterinæren. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tilgjengelig på: scielo.org.
  3. Baez E Gonzalez G, G Hernandez, Lopez E, Mega M. Evaluering av melkesyrebakterier og bifidobakterier med probiotiske potensiale i morsmelk og spedbarn feces i byen Acevedo, Miranda 2017. Degree arbeid for graden av kandidater bioassay. Universitetet i Carabobo, Venezuela.
  4. British Laboratory M.R.S agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  5. Wikipedia bidragsytere. MRS agar Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. januar 2018, 19:44 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org Tilgang 17. februar 2019.
  6. Roy D. Media for isolering og oppregning av bifidobakterier i meieriprodukter. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.