MacConkey Agar grunnlag, forberedelse og bruk

den MacConkey agar Det er et solid kulturmedium som tillater eksklusiv isolasjon av Gram-negative baciller. Av denne grunn er det et selektivt medium og tillater også å skille mellom fermenterende og ikke-fermenterende baciller av laktose, noe som gjør det til et differensielt medium. Det er et av de mest brukte kulturmediene i et mikrobiologi laboratorium.

Dette mediet brukes hovedsakelig for isolering av Gram-negative baciller som tilhører familien Enterobacteriaceae, inkludert opportunistiske og enteropatogene arter.

Det kan også brukes til å isolere andre enteriske baciller som bor i mage-tarmkanalen, men hører ikke til Enterobacteriaceae, som Aeromonas sp, Plesiomonas sp, blant annet.

Endelig kan det isolere andre ikke fermentativ Gram-negative staver glukose finnes i atmosfæren, jord eller vann, men noen ganger kan være opportunistiske patogener som Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, blant annet.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 MacConkey Agar
• 2 Fremstilling
• 3 Bruk av konvensjonell MacConkey agar
• 4 Andre varianter av MacConkey agar
  • 4.1 MacConkey agar med sorbitol
  • 4.2 MacConkey Agar uten krystallfiolett eller salt
  • 4.3 MacConkey agar med cefoperazon
  • 4.4 MacConkey Agar forberedt med 10% sjøvann v / v
• 5 referanser

fundament

MacConkey Agar

Grunnlaget for dette mediet kan forklares gjennom beskrivelsen av dets komponenter, fordi hver har en hensikt som bestemmer en egenskap av den.

Gallsalter og fiolett krystall

I denne forstand har MacConkey agar en kompleks sammensetning. Først av alt inneholder det gallsalter og fiolett krystall.

Disse elementene er ansvarlige for å hemme veksten av Gram-positive bakterier og noen krevende Gram-negative baciller. Til gjengjeld favoriserer det utviklingen av Gram-negative baciller som ikke påvirkes av disse stoffene. Det er derfor det er et selektivt medium.

Det sies å være litt selektiv i forhold til andre medier som også hemmer veksten av Gram-positive bakterier og også av de fleste gramnegative bakterier.

Det er ekstremt selektivt for et bestemt slekt, som TCBS agar for isolering av Vibrio cholerae og andre lignende halofile og alkalofile arter.

Peptoner, polypektoner og laktose

Inneholder stoffer som gir de nødvendige næringsstoffene til mikroorganismer som utvikler seg i dette mediet, for eksempel peptoner, polypektoner og laktose.

Laktose er det sentrale punkt at mediet er en differensial medium at mikroorganismer har evnen til å fermentere laktose utvikle sterke rosa kolonier.

Noen bakterier kan gjære laktose sakte eller svakt, utvikle blekrosa kolonier og forbli positiv laktose.

De som ikke gjærer laktose, bruker peptoner som energikilde, og produserer ammoniakk, som alkaliserer mediet. Koloniene som oppstår er derfor fargeløse eller transparente.

PH indikator

Fargeskiftet oppnås gjennom en annen viktig forbindelse som har MacConkey agar. Denne forbindelsen er pH-indikatoren, som i dette tilfellet er nøytralt rød.

Gjæringen av laktose genererer produksjonen av blandede syrer. De syrer mediet ved en pH under 6,8..

Dette medfører at pH-indikatoren vender mot en intens rosa nyanse. Fargens intensitet kan variere avhengig av den endelige pH-verdien.

Destillert vann, natriumklorid og agar

På den annen side inneholder den destillert vann og natriumklorid som gir hydrering og osmotisk likevekt til mediet. Til slutt inneholder mediet agar, som er basen som gir konsistensen av fast medium.

Det forberedte MacConkey agarmediet må ha en endelig pH justert til 7,1 ± 0,2..

forberedelse

Til en liter av MacConkey-agar bør veie 50 g dehydrert medium, deretter plassert i en ampulle og oppløst i en liter destillert vann. Etter 10 minutters hviler oppvarmes det ved å blande konstant til det kokes i 1 minutt.

Legg deretter fiola i autoklaven og steriliser ved 121 ° C i 20 minutter. På slutten av tiden fjernes den fra autoklaven og får avkjøles til en temperatur på 45 ° C, deretter serveres i sterile petriskål inne i en laminær hette eller foran Bunsen-brenneren..

Tillat å størkne og lagre i en plateholder innvendig og kjøle ned ved 2-8 ° C til bruk.

For å oppnå en MacConkey-agar som hemmer sværringseffekten produsert av Proteus-slekten, brukes en lav-salt MacConkey agar..

Bruk av konvensjonell MacConkey agar

MacConkey agar er inkludert i alle sett med kulturmedier som er arrangert for såing av kliniske prøver mottatt i laboratoriet. Det er også nyttig i matmikrobiologi og miljømikrobiologi.

Mangfoldet av Gram-negative baciller som vokser i dette mediet, uttrykker fenotypiske egenskaper som hjelper en presumptiv diagnose av arten i spørsmålet. For eksempel er størrelsen, fargen, konsistensen og lukten av koloniene noen av egenskapene som kan lede.

I dette miljøet, arter av Escherichia coli, Klebsiella sp og Enterobacter sp produsere sterke rosa kolonier, omgitt av et område av utfelt galle.

I så mye bakterier som Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp og Hafnia sp de kan vises uten farge etter 24 timer eller blekrosa på 24 -48 timer.

På samme måte produserer slægten Proteus, Edwadsiella, Salmonella og Shigella fargeløse eller gjennomsiktige kolonier.

Andre varianter av MacConkey agar

Det finnes andre varianter av MacConkey agar som har spesifikke formål. Neste er de nevnt:

MacConkey agar med sorbitol

Dette mediet ble utformet for å skille den enteropatogene stammen (Escherichia coli enterohemorragisk O157: H7) av resten av stammen av Escherichia coli.

Dette mediet endrer karbohydratlaktosen for sorbitol. Stammen av E. coli enterohaemorrhagic O157: H7 skiller seg fra resten fordi de gjære sorbitol og derfor fåes transparente kolonier, mens de andre stammer E. coli hvis de gjærer sorbitol og koloniene er sterke rosa.

MacConkey Agar uten krystallfiolett eller salt

Denne agar skiller seg mye fra klassisk MacConkey-agar, da den ikke har krystallviolet, kan Gram-positive bakterier vokse.

På den annen side hemmer fraværet av salt utseendet av swarming på agar produsert av noen enteriske baciller, som for slekten Proteus, og dermed lette isoleringen av alle tilstede bakterier, inkludert Gram-positive bakterier.

MacConkey agar med cefoperazon

Denne varianten av MacConkey-agar ble designet for å isolere i utgangspunktet Laribacter hongkongensis og senere skjønte de at det var nyttig for isoleringen av Arcobacter butzleri. EnBegge er litt buede negative Gram baciller resistente mot cefoperazon.

Disse bakteriene har nylig blitt knyttet til forårsake gastroenteritt og diaré kjøpt i asiatiske og europeiske individer, fremstår som to kraftige nye patogener.

Antistoffet tillater å hemme den medfølgende floraen i mage-tarmkanalen, som favoriserer utviklingen av disse bakteriene, og hindrer dem i å gå ubemerket, siden de krever 72 timer å vokse.

MacConkey Agar forberedt med 10% sjøvann v / v

Denne varianten er nyttig for evaluering av bakterielle helseindikatorer for fekal forurensning, inkludert totale koliformer og fecale koliformer i rekreasjons saltvann (strender og bukter).

Cortez et al. 2013 viste at mediet fremstilt på denne måten øker utvinningen av disse mikroorganismer i saltvannsmiljøet betydelig sammenlignet med bruken av MacConkey agar fremstilt med destillert vann..

Dette skyldes at det modifiserte mediet stimulerer veksten av bakterier som er fysiologisk i hvilemodus "levedyktig men ikke kultiverbar", derfor kan de ikke gjenvinnes i konvensjonelle medier.

referanser

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Bruk av cefoperazon MacConkey agar for selektiv isolering av Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. "MacConkey Agar." Wikipedia, Den frie encyklopedi. 4. april 2018, 18:16 UTC. 29 Des 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt av kulturmedier tilberedt med sjøvann på helseindikatorer i marine farvann i Chichiriviche spa, Falcón-staten, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2. utgave. UCA Publikasjonstjeneste.