EF-buljongfundament, forberedelse og bruk



den EF-buljong eller kjøttkraft Escherichia coli Det er et selektivt flytende kulturmedium. Dette mediet anbefales av standardmetodene for telling av totale og fecale koliformer, ved teknikken med det mest sannsynlige tallet (NMP) i vann- og matprøver, hvor hovedagenten er involvert Escherichia coli.

EF-buljongen består av triptein, laktose, gallsalter, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat, natriumklorid og vann. Formelen er strategisk utformet for å favorisere veksten av totale og fecale koliformer og forhindre utvikling av andre tilhørende mikroorganismer.

Bakterien Escherichia coli er den viktigste fecale coliform tilstede som en forurensning i vann og matkilder, som forårsaker viktige gastrointestinale påvirkning.

Det bør bemerkes at det er mange serotyper av Escherchia coli; blant dem kan vi nevne enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropathogen (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) og enteroaggregative (EAEC).

Dette betyr at de har kapasitet til å tillate utviklingen av dem alle, men uten å kunne skille mellom dem. For å gjøre dette må ytterligere tester utføres.

Den mikrobiologiske studien av vann og mat med det mest sannsynlige tallet (NMP) for søken av totale og fecale koliformer er en protokoll som er i samsvar med flere faser. presumptiv fase, bekreftelsesfase og ferdigstillingsfase. EF-buljongen brukes i bekreftelsesfasen.

index

  • 1 Foundation
    • 1,1 EF-buljong
    • 1,2 EC-buljong modifisert med novobiocin
  • 2 Fremstilling
    • 2,1 EC buljong
    • 2,2 EC-buljong modifisert med novobiocin
  • 3 Bruk
    • 3.1 Analyse av totale og fecale koliformer
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 anbefalinger
  • 6 Referanser

fundament

EF-buljong

EC-mediumet er basert på å gi de nødvendige næringselementene for optimal utvikling av totale og fecale koliformer, hvor bakterien er inkludert Escherichia coli.

Disse næringselementene leveres av triptein, som er en utmerket kilde til peptider og aminosyrer. I tillegg inneholder den også laktose, et gjærbart karbohydrat som gir energi og gjør det mulig å vise om bakteriene produserer gass.

På den annen side inneholder mediet gallsalter som gir selektiv karakter, siden det hemmer veksten av Gram-positive mikroorganismer som kan være tilstede i prøven..

På samme måte fungerer dikaliumfosfat og monokaliumfosfat som et pH-balanseringssystem. Dette systemet er nødvendig, fordi laktosen inneholdt i buljongen har en tendens til å surgjøre mediet når det fermenteres av mikroorganismer, men dette kompenseres av fosfatsalter.

Derfor er disse elementene avgjørende, fordi den ukontrollerte surheten kan påvirke riktig utvikling av de ønskede mikroorganismer.

For sin del stabiliserer natriumkloridet mediet osmotisk, mens vann er løsningsmidlet av de oppløste oppløsninger og gir væskekonsistensen til mediet.

EF-buljong modifisert med novobiocin

Okrend og Rose opprettet et utvalg av EF-buljong, kalt EC-buljong modifisert med novobiocin. Modifikasjonen besto i reduksjon av konsentrasjonen av gallsalter og tilsetningen av 20 mg / dl novobiocin.

Denne modifikasjonen favoriserer utvinningen av stammer av Escherichia coli enterohemorragisk (O157: H7).

Denne bakterielle serotypen forårsaker alvorlig hemorragisk kolitt som kan forårsake hemolytisk uremisk syndrom (HUS); som igjen kan generere akutt nyresvikt, med høy dødelighet som kan oppnå opptil 50% hos eldre.

På grunn av sykdommen og dødeligheten forårsaket årlig av denne bakterien på grunn av forbruket av forurenset mat, anbefaler USAs Department of Agriculture (USDA) i stor grad bruken av dette.

forberedelse

EF-buljong

Veid 37,4 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen skal stå til hvile i 5 minutter. Deretter oppløses i en varmekilde ofte oppløsningen.

Når det er oppløst, fordeles det i reagensrør som tidligere er kondensert med et Durham-rør innvendig. Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

PH i mediet bør være 6,9 ​​± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er beige og fremstilt er lysgult.

Vinene lagres i kjøleskap til de brukes. Ved brukstid skal buljongene være ved romtemperatur.

På den annen side kan EF-buljongen også fremstilles ved dobbelt konsentrasjon.

EF-buljong modifisert med novobiocin

Vekt 36,7 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter vann. Resten av preparatet er det samme som det som er beskrevet ovenfor.

bruk

Analyse av totale og fecale koliformer

EF-buljongen er ideell for den bekreftende fasen av studiet av coliforms ved NMP-metoden, både i vannprøver, som i farmasøytiske produkter og mat.

Lazy, turbid og gassproduksjonsbuljonger oppnådd i presumptiv fase, bør resesed i 2% lys grønn galle og EC buljong.

For totale koliformer inkuberes EF-buljongene i aerobiose i 24 til 48 timer ved 37 ° C, og for fekale coliformer inkuberes de i aerobiosi i 24 til 48 timer ved 44 ° C.

I begge tilfeller tolkes det på følgende måte: de uklare rørene med gassproduksjon regnes som positive. Hvis det ikke er gassproduksjon på 24 timer, fortsetter inkubering i opptil 48 timer.

EF-positive buljonger går til den komplette bekreftelsesfasen, som består av reseeding i selektive medier som Mac Conkey agar, EMB agar eller Endo agar..

Hvis den anvendte buljongen er EC modifisert med novobiocin, anbefales de positive rørene å reses på Mac Conkey agar med sorbitol.

Kvalitetskontroll

Kvalitetskontroll må utføres på hver gruppe preparert medium. Først må steriliteten til mediet vurderes. I denne forstand inkuberes en eller to buljonger uten å inokulere i aerobiose i 24 timer ved 37 ° C. Det forventede resultatet er en gjennomsiktig kjøttkraft, uten turbiditet eller fargeendring.

For det andre bør veksten av kjente stammer evalueres, for hvilke følgende bakterier kan brukes: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfeller forventes en tilfredsstillende mikrobiell utvikling, og observerer en uklar sump med gassproduksjon for E. coli og uten gass for salmonella.

Andre stammer som kan inkluderes i kontrollen er: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Disse stammene må være helt inhiberte.

anbefalinger

-Plasseringen av Durham rør er viktig for studiet av coliforms.

-Fordel mediet i testrørene før du steriliserer, aldri etter.

-Ikke bruk hvis mediet har mer enn 3 måneders forberedelse.

-Ikke bruk hvis det er noen endringer i medietes vanlige egenskaper.

referanser

  1. Laboratorier Britania. EC Medium. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorrhagiske. Senter for mattrygghet og folkehelse. 2010. Tilgjengelig på: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Middels EC. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
  4. Neogen. Middels EC modifisert med novobiocin. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Deteksjon, isolering og karakterisering av Escherichia coli produsent av Shiga-toksin fra ferskt kjøttbiff fra slakterier i Concepción, provinsen Tucumán. Rev Microgol av Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tilgjengelig på: www.scielo.org.