Foundation lactosado buljong, forberedelse og bruk



den laktos bouillon er et flytende, ikke-selektivt dyrkningsmedium, som hovedsakelig brukes som et pre-anrikningsmedium i isolering av Salmonella-stammer fra mikrobiologisk analyse utført på bearbeidede matvarer, melkeprodukter eller vann. Dette anbefales av International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMPF).

Mediet inneholder enzymatisk fordøyelse av gelatin, kjøttekstrakt og laktose, stoffer som er nødvendige for bakteriell vekst. I tillegg er laktose en gjærbar karbohydrat, så noen coliforms kan dele den med gassproduksjon.

Derfor er laktosebuljong anbefalt av American Public Health Association (APHA) for presumptive studie av total og fekal koliforme bakterier, og kaller det et utmerket alternativ for å erstatte lauryl buljong sulfate Tryptosefosfat standard teknikk mest sannsynlige tall (NMP ), brukt til mikrobiologisk analyse av prøver av mat, melk og overflatevann, underjordisk, rekreasjons-, husholdnings- og industriavfall.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Foranrikning
    • 3.2 Analyse av totale og fecale koliformer
  • 4 Kvalitetskontroll av mediet
  • 5 referanser

fundament

For den mikrobiologiske analysen av noen prøver er trinnet for forhåndsanrikning avgjørende for å kunne gjenopprette en bestemt mikroorganisme som kan være i svært liten mengde eller under ugunstige forhold som bryter eller minimerer dens levedyktighet.

Slike er tilfelle av tørre og bearbeidede matvarer, muligens forurenset med Salmonellas sp. I disse tilfellene, hvis bakteriene er tilstede, har de hatt fysisk og kjemisk mishandling under produksjonsprosessen av produktet..

Slik at mikroorganismene utsettes for ugunstige faktorer som dehydrering, eksponering for hemmende eller giftige produkter, og overlappingen som genereres ved nærværet av andre bakterier i større mengde, bl.a..

I denne forstand har laktosbuljongen en reparerende effekt på mikroorganismens skadede strukturer, noe som får den til å gjenopprette og reprodusere på en slik måte at den kan detekteres.

Likeledes har laktosbuljongen muligheten til å fortynne de hemmende substansene som kan påvirke dets levedyktighet, slik at dens utvikling. I tillegg er næringsinnholdet av laktosbuljongen strategisk for å favorisere veksten av Salmonella sp over andre mikroorganismer.

For den endelige identifiseringen må den delkultiveres mot andre måter å definere avlinger.

På den annen side tillater sammensetningen av mediet også deteksjon av laktose-fermenterende mikroorganismer som produserer gass.

forberedelse

For å forberede en liter laktosbuljong, veier 13 gram av dehydratiserte medium og oppløses i 1000 ml destillert vann.

For å oppløse mediet i vannet kan du varme opp løsningen litt, men ikke for mye..

Når homogen er oppnådd, oppnås løsningen som følger: Hvis kjøttbøsen brukes til å søke etter coliforms, fremstilles et stativ med reagensrør, og et Durham-fermenteringsrør settes opp og ned.

Durhamrøret er en svært viktig detalj, fordi det vil tillate å oppdage dannelsen av gass, verdifulle data i søket etter coliformer.

Når rørene er klare, blir 10 ml av laktosbuljongen dispensert i dem, som må være nok til å dekke hele Durham-røret..

Hvis laktosbuljongen skal brukes som en berikningsbuljong, er det ikke nødvendig å plassere et Durham-fermenteringsrør. I dette tilfellet er det nødvendig med en større mengde medium (225 ml), som vil bli servert i 500 ml flasker, bred munn og med en termo-resistent skruehette.

Deretter blir rørene eller kolberene tatt til autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediet bør forbli ved en endelig pH på 6,9 ± 0,2 ved 25 ° C.

Vinene lagres i kjøleskap til de brukes.

Før bruk skal buljongene tempereres ved romtemperatur.

På den annen side kan laktosbuljongen også fremstilles ved dobbelt konsentrasjon.

Noen laboratorier legger til bromkresolpara til laktosbuljongen som en pH-indikator, for å vise rørene der det har vært laktosefermentering ved fargeendringen. I dette tilfellet tar buljongen en lilla farge og hvis gjæringen blir gul.

søknader

I mikrobiologi laboratorier laktoserte buljong er mye brukt som et relativt billig medium som gir pålitelige og raske resultater (24-48 timer).

Den kan brukes til analyse av totale og fecale koliforme stoffer i vann og mat eller som en pre-anrichment buljong for Salmonella.

Preenrichment

Foranrikning er et skritt før berikningen av prøven, noe som i stor grad forbedrer gjenvinningen av bakterier av slekten Salmonella i behandlede matvarer.

For å gjøre dette blir prøven av den faste mat (25 gram) eller væske (25 ml) podet i 225 ml laktosbuljong og inkubert i 24 til 48 timer. Deretter blir selenittcystinbuljong eller tetrathionatbuljong subkultivert i et beriket medium. Deretter går det videre til selektive medier XLD og SS.

Analyse av totale og fecale koliformer

Det er et utmerket middel som indikator for fekal forurensning.

Derfor er laktosbuljongen ideell for den presumptive fasen av den koliforme studien ved den mest sannsynlige tallmetoden.

For prøver hvor et stort antall coliforme det er mistanke om lavere mengde derav (1 ml) ble inokulert, mens for prøver hvor færre koliformer mer mistenkt prøvevolum (10 ml) ble inokulert.

10 fortynninger er laget for analysen-1, 10-2, 10-3, danner et 3-5 rørbatteri for hver konsentrasjon som benyttes.

Fra hver fortynning blir det samme volum sådd til laktosbuljongene.

Rørene inkuberes i 24 timer. Kjøttene som er negative, inkuberes i 24 timer mer.

Fortolkningen av resultatene er gjort ved å observere to egenskaper: den første er tilstedeværelsen eller fraværet av turbiditet, og da dette mediet ikke inneholder en pH-indikator, vil det ikke bli endret i farge.

Den andre er produksjonen eller ikke av gass. Gassen er lett demonstrert i Durham-røret, ved utseendet til en eller flere luftbobler inni.

Det anses å være positivt hvis begge egenskaper er observert, det vil si turbiditet med gassproduksjon. Positive rør bør re-seeded i bekreftende medier (buljong Brilliant Green 2% Galle og EC buljong).

Kvalitetskontroll av mediet

- I preparatet av mediet er det viktig å ikke glemme å plassere Durhams-rørene hvis formålet med det samme er studiet av coliforms.

- Ikke overopphet mediumet før det steriliseres.

- Fordel i testrør før sterilisering, aldri etter.

- Ikke bruk hvis mediet har mer enn 3 måneders forberedelse.

- Ikke bruk hvis du merker noen endring i vanlige kjennetegn ved mediet.

- Når du forbereder en sats med laktos kjøttkraft, test kvaliteten på det ved å plante stammer kjent som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii og Klebsiella pneumoniae. De vokser veldig bra, med gassproduksjon (positiv kontroll).

- Det kan også inkludere Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, som vokser bra, men uten gassproduksjon (negativ kontroll).

- Det skal bemerkes at den opprinnelige fargen til det dehydrerte mediet er beige og det av mediet fremstilt meget klart og gjennomsiktig, gult. Hvis det er endring i farge eller utseende, kan det oppstå forringelse av det samme.

referanser

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi og miljømikrobiologi. (2013) 1ste utgave. Universitetet i Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. (2009). Teknikker for mikrobiologisk analyse av mat. 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico.
  3. Laboratorier Conda Pronadisa. 2017. Laktose buljong dobbelt konsentrasjon (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Sammenligning av teknikker for utvinning av coliforme bakterier fra sjøsedimentet av Xochimilco, Mexico. Rev. argent. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Tilgjengelig på: scielo.org.
  5. Sotomayor F, V Villagra, Cristaldo G, Silva L, Ibanez L. Bestemmelse av mikrobiologisk kvalitet av vann fra artesisk avdelinger distriktene Central, Cordillera og kommune Capital. Mem. Inst. Investig. Cienc. helse 2013; 11 (1): 5-14. Tilgjengelig fra: scielo.iics.