Dele:
Selenitt kjøttkraft fundament, forberedelse og bruk
den selenitt kjøttkraft Det er et selektivt flytende kulturmedium. Den ble designet av Leifson for anrikning av prøver hvor tilstedeværelsen av enteropatogene bakterier av slekten Salmonella er mistenkt..
Dette betyr oppfyller kravene til American Public Health Association (APHA), og derfor er akseptert for gransking av Salmonella i avføringsprøver, urin, flytende eller fast mat, vann, etc..
Den kjemiske sammensetningen som den besitter, favoriserer utvinningen av disse mikroorganismer og i sin tur hemmer veksten av andre. Det er hovedsakelig giftig for de fleste bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien. Det tillater imidlertid også utvinning av Shigella-stammer og hindrer ikke veksten av Pseudomonas og Proteus..
Den består av vannfri natriumhydrogen selenitt, vannfritt natriumfosfat, peptoner og laktose. Det er også en variant som cystin blir tilsatt, derav navnet selenitt-cystinbuljong.
I dag er foretrukket anvendelse av selenitt cystin kjøttkraft, siden høyere prosentandel gjenvinning av tilsvarende den som er observert med andre selektive medier for det samme formål Salmonella, såsom natriumtetrationat kjøttkraft erholdes.
index
- 1 Foundation
- 2 Fremstilling
- 2.1 - Selena
- 2.2-Forberedelse av kommersielt medium
- 2.3 Variant selenitt-cystinbuljong
- 3 bruksområder
- 4 Seeded
- 5 Kvalitetskontroll
- 6 Begrensninger
- 7 referanser
fundament
Peptonene som finnes i buljongen tjener som næringsstoffer for riktig utvikling av mikroorganismer. Salmonellastammer bruker peptoner som kilde til nitrogen, vitaminer og aminosyrer.
Laktose er det fermenterbare karbohydrat, mens natriumselenitt er den inhibitor som forsinker veksten av gram-positive bakterier og de fleste bakterier som er tilstede i tarmfloraen, spesielt av familien Enterobacteriaceae. Natriumfosfat er bufferen som stabiliserer mediumets pH.
I tilfelle av selenittbuljongvarianten som inneholder L-cystin, er denne ytterligere forbindelsen et reduksjonsmiddel som minimerer toksisiteten av selenitt, øker utvinningen av salmonella.
forberedelse
-Selenitt kjøttkraft
Hvis du har komponentene i blandingen, kan du veie:
4 g vannfri natrium hydrogen selenitt.
10 g vannfritt natriumfosfat.
5 gr av peptoner.
4 g av laktose.
Oppløs forbindelsene i 1 liter sterilt destillert vann. Det kan oppvarmes litt for å oppløse i sin helhet.
Noen laboratorier utsetter mediet i 10 minutter i flytende damp for å sterilisere det, siden autoklav ikke skal brukes. Hvis mediet er sterilisert, kan det oppbevares i kjøleskapet til det brukes.
Den kan også tilberedes uten sterilisering og serverer direkte 10 til 15 ml til de sterile reagensrørene.
I dette tilfellet skal det stå til hvile og brukes umiddelbart. Siden mediet ikke er sterilt, kan det ikke oppbevares i kjøleskap for senere bruk.
-Fremstilling av det kommersielle medium
Hvis det kommersielle medium er tilgjengelig, veies 23 g av dehydratiserte medium og oppløses i en liter sterilt destillert vann. Varm kort for å fullføre oppløsningen. Steriliser ikke i en autoklav. Server aseptisk 10 eller 15 ml i sterile reagensrør.
Den endelige pH i mediet skal være 7,0 ± 0,2.
Det bør bemerkes at fargen på dehydratiserte medium er beige og preparatet er klart og gjennomsiktig gult.
Variant selenitt-cystinbuljong
Den inneholder de samme forbindelsene av selenittbuljongen, men 10 mg cystin blir tilsatt. Resten av prosedyren er nøyaktig den samme som beskrevet ovenfor.
søknader
Dette mediet er spesielt egnet til epidemiologiske studier, i tilfeller hvor sykdommen ikke er i sitt akutte stadium, asymptomatiske pasienter eller friske bærere.
Isolasjonen av Salmonella-slekten er vanligvis vanskelig, da de vanligvis er funnet å forurense prøvene på en knapp måte. Å være i små mengder overlappes lett av veksten av andre bakterielle slægter som finnes i større mengder.
På den annen side er råmaterialet som behandles matvarer, ofte utsatt for varme, til dehydreringsprosesser, blant annet ved bruk av desinfeksjonsmidler, strålings- og konserveringsmidler..
Derfor mishandles Salmonellene som er tilstede i råmaterialet ved innsending av produktet til de nevnte industrielle prosessene. På samme måte, når det gjelder kliniske prøver som feces, kan stammene være svake hvis de kommer fra pasienter som har blitt behandlet med antibiotika..
Derfor, til en hvilken som helst prøve i hvilken nærvær av Salmonella er mistenkt for å være pre-beriket med laktose buljong, og deretter anriket på selenitt optimalisere utvinningen selektiv, som for eksempel agar-agar SS-xylose media, lysin desoksycholat (XLD ), enterisk Hektoen agar (HE) og grønn-lys agar, blant andre.
plantet
For avføring prøver prøver 1 g prøve og suspenderes i et rør med 10 til 15 ml selenittbuljong. Hvis avføringen er flytende, ta 1 ml og suspendere i buljongen. For rektal swabs, utslipp swab materialet i kjøttkraft.
I prøver av fast mat tar 1 gr og suspenderes i selenittbuljongen.
Bland i flytende mat i like deler med selenittbuljongen ved dobbelt konsentrasjon.
For urinprøver sentrifuger, kast supernatanten, ta alt sedimentet og suspendere det i selenittbuljongen.
Kjøttene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer inkubering. Bakteriell vekst fremgår av turbiditet. Et ekstra rør per prøve kan også inkluderes for å inkubere ved 42 ° C. Deretter sår selektivt fast medium fra selenittbuljongen.
Kvalitetskontroll
For å kontrollere sterilitet inkuberes en selenittbuljong fra hver sats uten inokulering ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes at det ikke er turbiditet eller endring av farge på mediet.
For å kontrollere medietes gode funksjon kan kjente stammer brukes, for eksempel:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 og Proteus mirabilis ATCC 43071.
De forventede resultatene er:
- For de tre første bakteriestammen må veksten være tilfredsstillende.
- til Escherichia coli delvis inhibering.
- For Proteus moderat vekst.
begrensninger
Medium selenittbuljongen er giftig for menneskelig hud, derfor bør direkte kontakt unngås.
referanser
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Bor-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning kulturmedier natriumselenitt og natriumtetrationat, inkubert ved både 37 ° C og 42 ° C i isolasjonen av Salmonella avføring av bærere avføring. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
- Laboratorier Britania. Selenito Caldo. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- Neogen Laboratories Selenito kjøttkraft Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
- González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologisk isolasjon av Salmonella spp. og molekylære verktøy for deteksjon. Helse, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tilgjengelig fra: http://www.scielo.org.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.