Dele:
Soy bouillon tripticaseína foundation, forberedelse og bruk
den soya buljong tripticaseína Det er et flytende kulturmedium, veldig næringsrikt og ikke-selektivt. På grunn av sin store allsidighet er det et av de mest brukte flytende kulturmediene i mikrobiologilaboratoriet.
Det er også kjent som bouillon tripticasa soya eller fordøyd kasein-soya, hvis forkortelse er TSB for sin akronym på engelsk Tryptisk er jeg Broth eller CST for sin akronym på spansk. Dens bruk er svært variert på grunn av sammensetningen. Den består av triptein, soypepton, natriumklorid, dikaliumfosfat og glukose.
Det er i stand til å reprodusere klinisk viktige patogene bakterier, inkludert de som er ernæringsmessige krevende og anaerobe bakterier. Noen opportunistiske sopp og forurensninger kan også utvikle seg i dette miljøet.
På grunn av sin høye næringseffekt har den høy følsomhet for å oppdage mikrobiell forurensning, og ble derfor valgt av USDA dyre- og plantesikkerhetsinspeksjonstjeneste for mikrobiologisk analyse av vaksiner..
På samme måte oppfyller tripticase soysuppe kravene til de forskjellige farmakopéene (europeisk EP, japansk JP og nordamerikansk USP) for mikrobiologisk undersøkelse av produkter på industrielt nivå, for eksempel kosmetikk og mat.
På den annen side er det verdt å nevne at dette til tross for det store verktøyet er relativt rimelig, så det er rimelig for de fleste mikrobiologilaboratorier. Det er også veldig lett å forberede.
index
- 1 Foundation
- 2 Fremstilling
- 2.1 Tryptikamin soyabønne
- 2.2 -varianter av tripticasein soy bouillon
- 3 Bruk
- 4 Seeded
- 5 Kvalitetskontroll
- 6 Begrensninger
- 7 referanser
fundament
Triptina, pepton og glukose gir ham de essensielle næringsrike egenskapene for å gjøre det til et ideelt medium for en rask mikrobiell utvikling.
Omtrent 6 til 8 timer inkubasjon kan allerede ses vekst i de fleste mikroorganismer. Det er imidlertid langsomt voksende stammer som kan vare i dager for å vokse.
Natriumklorid og dikaliumfosfat fungerer som henholdsvis osmotisk likevekt og pH-regulator. Tilstedeværelsen av vekst er påvist ved utseende av turbiditet i mediet; Hvis det ikke er vekst, forblir mediet gjennomskinnelig.
På grunn av sin lyse farge er det mulig å observere produksjonen av pigmenter, som den som er vist på bildet som er plassert i begynnelsen av artikkelen, som tilsvarer pigmentet produsert av Pseudomonas aeruginosa.
forberedelse
-Tryptisk soyabønnebuljong
For å klargjøre tripticase soy buljong, veie 30 gram av dehydratiserte kommersielle medium i digital skala. Deretter oppløses det i en liter destillert vann inneholdt i en fiola.
Blandingen får stå i 5 minutter og bringes så til en varmekilde for å hjelpe til i oppløsningen av mediet. Det skal ristes ofte mens du koker i 1 minutt.
Når det er oppløst, fordeles det i rør av passende størrelse etter behov. Rør med bomullsplugg eller bakelittlokk kan brukes. Deretter steriliseres rørene med mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
PH i mediet bør være 7,3 ± 0,2
Det bør tas hensyn til at fargen på det dehydrerte kulturmediet er lys beige og skal lagres ved 10 til 35 ° C, på et tørt sted. Mens kjøttbrønden er tilberedt, er lysegul og skal oppbevares i kjøleskap (2 til 8 ° C).
-Variasjoner av tripticasein soy bouillon
Tryptikaminmodifisert soyabuljong kan fremstilles ved å legge gallsalter og novobiocin for å gjøre det selektivt for isolering av E. coli. Et annet alternativ til samme formål er å tilberede tripticase soy bouillon supplert med vancomycin, cefixime og telluritt (2,5 μg / ml).
På den annen side kan mer glukose (0,25%) tilsettes til trypticasein soy bouillon når målet er å stimulere dannelse av biofilm.
bruk
Det er næringsrik nok til å tillate veksten av krevende eller irriterende bakterier som Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp og Brucella sp, Det er ikke nødvendig å supplere med blod eller serum.
På samme måte kan noen sopp utvikles i denne buljongen, for eksempel Candida albicans kompleks, Aspergillus sp og Histoplasma kapulatum.
I tillegg er dette mediet under anaerobe forhold ideelt for å gjenvinne bakterier som tilhører Clostridium-slekten, samt anaerobe, ikke-sporiserte bakterier av klinisk betydning..
Hvis tilsatt, kan 6,5% natriumklorid brukes til vekst av Enterococcus og andre gruppe D Streptococcus.
På forskningsnivå har det vært svært nyttig i ulike protokoller, spesielt i studien av bakterier som danner biofilmer eller biofilmer. Det brukes også til å forberede bakteriesuspensjonen på 0,5% av Mac Farland som er nødvendig for å utføre antibiogrammet ved hjelp av Kirby og Bauer.
I dette tilfellet tas 3 til 5 kolonier med lignende utseende og emulgeres i 4-5 ml trypticasein soy bouillon. Den inkuberes deretter i 2 til 6 timer ved 35-37 ° C og justeres deretter til ønsket konsentrasjon ved bruk av steril saltoppløsning. Trypticase soy bouillon bør ikke brukes i 18-24 timer inkubering.
plantet
Prøven kan bli sådd direkte eller subkultiverte rene kolonier hentet fra selektive medier. Inokulumet skal være lite for ikke å skyte mediet før inkubasjon.
Inkuberer normalt ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer, men disse forholdene kan variere avhengig av mikroorganismen som er søkt. Den kan også inkuberes under anaerobe forhold ved 37 ° C i flere dager om nødvendig. For eksempel kan krevende eller sakte voksende mikroorganismer inkuberes inntil 7 dager.
I den mikrobiologiske analysen av farmasøytiske stoffer - som vaksiner - er protokollene strengere. I disse tilfellene blir buljongen uten vekst ikke kassert før den når 14 dager med kontinuerlig inkubering.
Kvalitetskontroll
For hver sats forberedt, bør 1 eller 2 rør inkuberes uten inokulering for å demonstrere sterilitet. Det må forbli uendret.
Du kan også plante kjente stammer for å evaluere deres oppførsel. Blant de stammene som kan brukes er:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende under forholdene for atmosfære og temperatur som passer for hver mikroorganisme.
begrensninger
-Gisingen av glukose medfører reduksjon av pH i mediet ved fremstilling av syrer. Dette kan være ugunstig for overlevelse av noen mikroorganismer som er følsomme for surhet.
-Det anbefales ikke å opprettholde stammer, fordi bakteriene etter noen få dager tømmer næringsstoffene med tilhørende akkumulering av giftige stoffer som gjør miljøet ugjestmilde.
-Det må tas hensyn til alle sterilitetsprotokoller, siden buljongene er lett forurenset.
-Etter å ha forberedt tripticasein, prøver ikke soya buljonger å overføre kjøttkraft til et annet sterilt rør, fordi denne typen manøvrer er svært utsatt for forurensning.
referanser
- Cona E. Betingelser for en god sensitivitetsstudie ved agar diffusjonstest. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Tilgjengelig på: scielo.org
- British Laboratory Trytein soya buljong. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- MCD Laboratory. Trytica soya buljong. Tilgjengelig på: electronic-systems.com
- Neogen laboratorium. Soy Broth Triptych. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluering av teknikken for magnetisk immunoseparasjon for utvinning av Escherichia coli O157: H7 i melkekrem. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Tilgjengelig på: scielo.org.ve
- Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm-dannelse i isolert Staphylococcus aureus i henhold til antimikrobiell følsomhet og klinisk opprinnelse. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Tilgjengelig på: saber.ucv.ve
- Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolering av Escherichia coli O157: H7 i avføring Prøver av dobbeltformål storfe fra Miranda kommune, Zulia State, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Tilgjengelig på: scielo.org