Tetrathionate buljongfundament, forberedelse og bruk



den tetrerende kjøttkraft eller TT-buljong er et selektivt flytende dyrkningsmedium for anrikning og utvinning av Salmonella-stammer. Det ble skapt av Müeller og senere endret av Kauffmann, derfor er det de som kaller det Müeller-Kauffmann kjøttkraft.

Det opprinnelige medium inneholdt proteosepeptoner, kalsiumkarbonat og natriumtiosulfat. Kauffmann la galle salter og skapt en annen modalitet med lyse grønne. Disse stoffene hemmer veksten av coliforms, slik at det frie mediumet for utvikling av patogene bakterier, i dette tilfellet Salmonella.

Modifikasjonen var svært vellykket fordi den økte mediefølsomheten betydelig. Derfor er det for tiden nyttig for søket av Salmonellas i enhver type prøve, men spesielt for fast eller flytende avføring og mat..

Dens forberedelse består av to faser; Det kommersielle medium er en base for fremstilling av tetrathionatbuljongen, og etterpå for tetrathionatet å bli dannet, tilsettes en jodisert jodoppløsning for å fullføre mediet.

American Public Health Association (APHA) anbefaler bruk av tetionatbuljong suppleres med lysegrønn for anrikning av prøver på leting etter Salmonella, siden den er mer selektiv enn tetrathionatbuljongen og selenittbuljongen.

Generelt er tetrathionatbuljongen ideell når bakterier av slekten Salmonella mistenkes i små mengder eller som misbrukes ved eksponering for hemmende stoffer eller ved industrielle prosesser som minimerer deres levedyktighet.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 - tetrationat
    • 2.2 -Variante tetrathionat buljong med lyse grønn
  • 3 Bruk
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 anbefalinger
  • 6 Referanser

fundament

Nåværende peptoner korresponderer med kasein pankreatisk fordøyelse og peptisk fordøyelse av animalsk vev. Disse gir kilden til karbon, nitrogen og næringsstoffer generelt for bakteriell vekst.

For sin del reagerer natriumtiosulfat med den ioderte løsningen for å danne tetrathionat. Dette hemmer veksten av coliforms og favoriserer utviklingen av bakterier som inneholder enzymet tetrathionatreduktase, blant dem er slammet Salmonella, men også Proteus.

Gallsalter virker også som en hemmende substans av de fleste Gram-positive bakterier og noen Gram-negative bakterier (coliformer).

Kalsiumkarbonat absorberer giftige stoffer som genereres ved dekomponering av tetrathionat, som danner svovelsyre. På denne måten nøytraliserer kalsiumkarbonat surheten og opprettholder pH i det stabile medium.

I tilfelle av den lyse grønne modaliteten, øker dette stoffet selektive kraften til tetrathionatbuljongen ved å hemme andre andre mikroorganismer enn slekten Salmonella..

forberedelse

-Tetrering kjøttkraft

Jodjodoppløsning

Regret:

  • 6 gr jod.
  • 5 g kaliumjodid.

Kaliumjodidet oppløses i ca. 5 ml sterilt destillert vann, deretter tilsettes iod litt etter litt mens blandingen oppvarmes. Etter at den er fullstendig oppløst, fylles den med sterilt destillert vann til det når et sluttvolum på 20 ml.

Halvbase for tetrathionat buljong

Veid 46 gram av dehydratiserte medium og suspender i 1 liter sterilt destillert vann. Bland og varme til helt oppløst, det kan koke i bare noen få minutter. Steriliser ikke i en autoklav. Basen av mediet får avkjøles til ca. 45 ° C, og på den tiden blir 20 ml av den iodede oppløsning tilsatt..

Etter tilsetning av løsningen skal iodurada til mediet brukes umiddelbart. Hvis du ikke vil bruke hele blandingen, fortsett som følger:

10 ml av basismediet fordeles i rør, og bare 0,2 ml av den iodede oppløsning tilsettes til de som skal inokuleres med prøver..

De som ikke skal brukes, kan fortsatt lagres i kjøleskap, men når mediet ikke steriliseres, er idealet å forberede den nøyaktige mengden som trengs..

Fargen til mediet før tilsetning av den jodiserte jodoppløsningen er melaktig hvit med hvitt utfelling og etter tilsetning er det brunt med et tett utfelling. Det observerte bunnfallet er normalt og tilsvarer kalsiumkarbonat som ikke oppløses. Den endelige pH i mediet er 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate buljongvariant med lyse grønn

For å fremstille tetrathionatbuljongen med lysegrønn utføres alle trinnene som er beskrevet ovenfor, men i tillegg tilsettes 10 ml av den lyse grønne oppløsningen tilberedt til 0,1% til blandingen..

Lysegrønn

Denne løsningen fremstilles som følger:

Vekt 0,1 g lyse grønn og suspender i 100 ml destillert vann. Varm opp til kokingen for å oppnå total oppløsning. Lagre i gule flaske.

bruk

For avføringprøver (avføringskultur) er protokollen som følger:

Inokuler 1 g fast avføring eller 1 ml flytende avføring i et rør med 10 ml klar-til-bruk tetrathionatbuljong. Rist kraftig og inkuber i aerobiosis ved 43 ° C i 6-24 timer.

Deretter skal du ta en alikvot på 10 til 20 μl av buljongen og subkulturen i et mediumselektiv for Salmonella, slik som SS-agar, XLD-agar, lysegrønn agar, Hektoen enterisk agar, blant andre..

Parallell må vaksinere selektivt medium for Salmonella med direkte prøve (avføring) uten anrikning. For prøver av rektal swabs, last ned materialet samlet i røret og fortsett som beskrevet ovenfor.

For matprøver veier 10 g fast mat eller 10 ml flytende mat og inokulerer en flaske med 100 ml ferdigstatt tetrathionatbuljong. Fortsett på samme måte som beskrevet ovenfor, men inkuber ved 37 ° C.

Som det kan ses, vil forholdet mellom prøven og buljongen alltid være 1:10.

Kvalitetskontroll

For å teste kulturmediet kan kjente kontrollstammer benyttes. De mest brukte er ATCC-sertifiserte stammer.

Stammen som skal brukes er Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

For Salmonella-stammer forventes en utmerket utvikling, mens Escherichia coli kan ha en svak eller vanlig utvikling, og Gram-positive stammer (Enterococcus og Staphylococcus) er delvis eller helt hemmet.

anbefalinger

-Siden dette mediet ikke hemmer veksten av Proteus, bruker noen laboratorier 40 mg / l novobiocin for å forhindre utviklingen av denne mikrobielle stammen. Antistoffet bør tilsettes før den jodiserte jodoppløsningen.

-Etter å ha forberedt mediet, inkludert den jodiserte jodoppløsningen, bør den ikke være mer enn 2 timer etter inokuleringen.

-I øyeblikket for å distribuere mediet i rørene, må blandingen homogeniseres kontinuerlig for å resuspenge det dannede bunnfallet.

-I mindre forurensede prøver inkuberes tetrathionatbuljongen ved 35-37 ° C, og i svært forurensede prøver anbefales inkubering ved 43 ° C..

referanser

  1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionat buljongbasen ifølge Müeller-Kauffmann. Tilgjengelig i:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionate Broth Base. Tilgjengelig i:
  3. Laboratorier Britania. 2015. Tetionat kjøttkraft base. Tilgjengelig i:
  4. Media BBL. 2005. Rørpreparater for dyrking av Salmonella-arter.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Bor-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning kulturmedier natriumselenitt og natriumtetrationat, inkubert ved både 37 ° C og 42 ° C i isolasjonen av Salmonella spp av bærerstoler. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220