Papa dextrose foundation, forberedelse og bruk



den papa dextrose agar Det er et solidt, ikke-selektivt næringsrikt kulturmedium. Det kan vokse bakterie- og sopparter, men bruken er spesielt indikert for isolering av filamentøse sopp og gjær. Det er også kjent som et PDA medium ved det engelske uttrykket Potato Dextrose Agar.

Det er spesielt nyttig for isolering av fytopatogene sopp, det vil si de som påvirker planter. For å plante prøver fra infiserte planter, kan andre medier som Sabouraud agar eller malta agar brukes, men for rutinemessig bruk er kartoffeldeksrose-agar foretrukket på grunn av større sporulering..

Den brukes også til å telle svampekolonier i prøver av kosmetikk, legemidler og noen meieriprodukter. På samme måte er det gunstig å plante prøver av hudskraping på jakt etter dermatofytter, som vokser veldig bra i dette mediet, utvikler sine karakteristiske pigmenter.

Potet dextrose medium er en veldig enkel og lett å forberede i laboratoriet. Den inneholder, som navnet antyder, kartoffelinfusjon, dekstrrose og agar-agar. I tillegg kan inhibitoriske stoffer bli tilsatt for å hindre bakterievekst og øke selektiviteten for sopparter.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 - Hjemmelaget (ikke-kommersiell) fremstilling av papa dextrose agar
    • 2.2 - Kommersiell fremstilling av papa dextrose agar
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Prosess for planting av planteprøver på potet dextrose agar
    • 3.2 Prosess for planting av prøver av hud, hår eller negler på papa dextrose agar
    • 3.3 Identifikasjonsprosedyre
    • 3,4 kolonitall
    • 3.5 Vedlikehold av soppstammer
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referanser

fundament

Papa dextrose agar er et dyrkningsmedium som gir de nødvendige næringselementene for utviklingen av filamentøse sopp og gjær.

Kombinasjonen av kartoffelinfusjon med glukose gir den perfekte energikilden for en tilfredsstillende vekst av sopp. Mens agar er den som gir konsistens til miljøet.

Mediet alene inhiberer ikke veksten av bakterier, så det er et ikke-selektivt medium. For å gjøre det selektivt trenger du tillegg av hemmende stoffer som vinsyre eller antibiotika.

forberedelse

-Hjemmelaget (ikke-kommersiell) fremstilling av potet dextrose agar

Petriskål

Den er forberedt på følgende måte:

Først og fremst blir potetene vasket veldig godt og fjerner smussene de har. De er kuttet i tynne skiver med alt og skall. 200 g poteter veies og legges til å koke i en liter destillert vann i en halv time.

Etter at tiden er filtrert eller anstrengt hele preparatet gjennom en gasbind.

Den oppnådde væsken blir fullført med destillert vann til den når en liter. Til infusjonen tilsettes 20 g agar-agar og 20 g dextrose, blandes godt og autoklaveres ved 121 ° C ved 15 pounds trykk i 15 minutter.

La avkjøle til 50 ° C og server i sterile petriskål. Forberedte plater lagres i kjøleskap.

klosser

Du kan også lage papa dextrose agar kiler.

I dette tilfellet, før sterilisering i autoklaven, plasseres 12 til 15 ml av mediet i rør, da de autoklaveres og ved avreise ligger de på spesielle bærer inntil størkningen. Lagre i kjøleskap.

Mediet forblir ved en pH på 5,6 ± 0,2, men noen laboratorier tilsetter 10% vinsyre for å senke pH til 3,1 ± 0,1 for å hemme bakteriell vekst.

På samme måte foretrekker andre laboratorier å legge til antibiotika for å gjøre det selektivt for dyrking av sopp og forhindre bakteriell utvikling.

-Kommersiell forberedelse av potet dextrose agar

Veie 39 g av det kommersielt tilgjengelige dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. La hvile i 5 minutter.

Blandingen oppvarmes ved omrøring ofte til total oppløsning. Deretter steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Plater eller kiler kan tilberedes. Fortsett som beskrevet ovenfor.

PH forblir ved 5,6 ± 0,2. Hvis pH 3,1 er ønsket, bør 14 ml 20% steril vinsyre tilsettes før servering på platene..

Fargen på det uforberedte mediet er beige og tilberedt er lysgult med et litt uklar eller opaliserende utseende.

søknader

Prosess for planting av prøver i potet dextrose agar

-For blader med flekker

Bladene er kuttet i stykker.

I et 50cc glass med 50% alkohol, legg brikkene av bladene (stykker farget og sunt), for å desinfisere overflaten i 20 til 30 sekunder. Trekk alkoholen og tilsett 20% natriumhypokloritt i 40 til 50 sekunder hvis de er tynne blader og øk tiden til 80 sekunder hvis det er bark og logger.

Trekk natriumhypokloritten og ta med et sterilt klips de desinfiserte delene og plasser dem på overflaten av mediet (maksimalt 10 stykker). Plasser datoen og inkuber fra 20 til 30 ° C.

-For frukt og knollvekster

Hvis frukten er kjøttfull, åpner du frukten som påvirkes av soppen og tar stykker med en steril skalpell, både den syke delen og den sunne delen, og plasser den på overflaten av agar.

Hvis frukten er sitrus, som en sitron eller en appelsin, bør du åpne og så frøene dine.

Når overflaten av frukten påvirkes og sporer observeres, er det best å bruke revet metode på platen; dette består i å røre sporene med en spatel i form av "L" sterilisert og avkjølt, og deretter utføre en zigzag såing 2 til 3 ganger på agar.

-For korn

De desinfiseres som beskrevet i bladene og legges deretter på agar.

-For grener og stengler

En skraping av barken utføres, og så blir biter av den friske og syke delen tatt og sådd direkte på agar..

De sådde platene inkuberes i aerobiosis ved 20-30 ° C i 72 timer.

Prosess for planting av prøver av hud, hår eller negler på papa dextrose agar

Prøven må tas ved hjelp av et skalpellblad nr. 11, enten for å kutte berørt hår, hudfling eller negler på jakt etter dermatofytter. Før du tar prøven, desinfiseres området med 70% alkohol.

-Hudprøve

I skalete lesjoner skal kanten av lesjonen skrapes, da det er mer sannsynlig å finne soppen.

I eksudative lesjoner tas prøven med tørr eller våt vatpinne. Så straks på potet dextrose agar eller Sabouraud agar. Unngå transportmiddel.

En annen metode for prøvetaking er gjennom teppet firkantet teknikken til Mariat og Adan Campos. I dette tilfellet gis det berørte området 5 ganger med et stykke steril ull for videre dyrking.

Prøven kan plasseres direkte i kulturmediet.

-Hårprøve

Avhengig av patologien kan den berørte delen bli kuttet av eller revet av røttene. Plasser prøven i kulturmediet.

-Fingernailprøve

Du kan skrape eller kutte en bestemt del av den berørte neglen. Det vil avhenge av type skade.

Klipp prøven i 1 mm stykker før såing for å øke sannsynligheten for kontakt av soppen med dyrkingsmediet.

Identifikasjonsprosedyre

Koloniene oppnådd i platen er isolert i rør som inneholder kartoffeldeksrose-agar for å utføre den makroskopiske studien av koloniene (utseende, farge, konsistens, utviklingsgrad)..

Den mikroskopiske studien (observasjon av strukturer og deres formasjoner) kan gjøres ved mikrokulturer eller direkte observasjon under mikroskopet mellom lamina og lamella.

Koloni teller

Dette mediet kan også brukes til å bestemme belastningen av sopp og gjær som finnes i planteprøver, mat, kosmetikk eller medisiner. Til dette formål brukes papa dextrose agar supplert med antibiotika, slik som: (kloramfenikol, klortetracyklin eller begge deler).

Hell 1 ml av prøven - fortrinnsvis fortynnet - til en steril og tom petriskål, smelter deretter en kartoffeldextrose agarplugg og la avkjøle til 45 ° C. Hell over petriskålen og roter til homogenisert. La det stå i ro til det stivner.

Inkuber i aerobiosis ved 20-25 ° C (forme) eller ved 30-32 ° C (gjær) i 5 til 7 dager eller mer, avhengig av hvilken type sopp som søktes og typen av prøven. To plater kan brukes til å inkubere i begge temperaturområder.

Vedlikehold av soppstammer

Papa dextrose agar kan brukes til å opprettholde levedyktige soppstammer i flere år.

For å gjøre dette dyrkes svampen i papa dextrose agar kiler, og når svampen vokser, er den dekket av mineralolje. Oljen må steriliseres i en autoklav i 45 minutter, og har en omtrentlig viskositet på 300 til 330 Saybolt. Oljen bør overstige skråtipset med 1 til 2 cm.

Kvalitetskontroll

Fra hver preparert sats skal en eller to plater tas og inkuberes ved 25 ° C i 48 timer eller ved 20 ° C i 96 timer. En god sterilitetskontroll er en der det ikke er utvikling av kolonier.

Også kjente eller sertifiserte kontrollstammer som:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. I alle tilfeller forventes god vekst.

referanser

  1. Laboratorier Britania. Papa glucosado agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Potet dextrose agar. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
  3. Insumolab Laboratory Potet dextrose agar. Tilgjengelig på: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Generell mykologi. 1994. 2. utg. Universidad Central de Venezuela, Bibliotek utgaver. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Vurdering av mikrobiologisk kvalitet Eye Shadow, Powder Compact Type en nasjonal produksjon Laboratory, i henhold til referansemetode Pharmacopeia USP 2005. Avhandling for tittelen farmasøytisk kjemi. Universitetet i San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Behandling av overflateprøver. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; s. 1-12