Agar Sabouraud grunnlag, forberedelse og bruk



den Sabouraud agar, også kjent som Sabouraud-dekstroseagar, er et fast medium, spesielt anriket for isolering og utvikling av sopp, så som gjær, muggsopp og dermatofyter.

Derfor kan dette medium ikke svikte i en mikrobiologisk laboratorium for tilstedeværelsen av patogene eller opportunistiske sopper, enten kliniske prøver eller klinikker. Tilsvarende er det også ideelle for vekst av trådformede bakterier, slik som Streptomyces og Nocardias. Bruken er meget bred, at den kan brukes i human Mycology, animalsk, vegetabilsk og industriell.

Dette mediet ble opprettet i 1896 av den anerkjente dermatologen Raimond Sabouraud, som ble en verdenskjent spesialist i forstyrrelser i hodebunnen, hovedsakelig forårsaket av dermatofytter..

Dens opprettelse var så viktig at den har blitt brukt siden da, og den fortsetter i dag, men med noen modifikasjoner.

Selv om spesielt for fungi, i dette mediet bakterier de kan vokse, og dermed for prøver som inneholder forskjellige flora, inkludert antibiotika er nødvendige under fremstillingen, og således hemmer veksten av bakterieflora som kan være tilstede.

Valget av antibiotika bør gjøres grundig og ta hensyn til hvilken type sopp du vil gjenopprette, siden noen hemmer seg i nærvær av visse stoffer.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Mest brukte kombinasjoner av Sabouraud dextrose agar med antibiotika
  • 2 Fremstilling
    • 2,1 Dextrose Sabouraud Agar 
    • 2.2 Sabouraud Dextrose Agar (Modifikasjon av Emmons)
    • 2.3 Sabouraud dextrose agar (modifikasjon av Emmons) med kloramfenikol
    • 2,4 Dextrose Sabouraud Emmons agar med cykloheximid
    • 2,5 Dextrose Sabouraud Agar (Emmons) med kloramfenikol og cykloheximid
    • 2.6 Andre antibiotika som kan legges til
  • 3 Spesielle hensyn
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 bruksområder
    • 5.1 Primær dyrking
    • 5.2 Sporulasjon
    • 5.3 Bevaring
    • 5.4 Mikrokulturer
    • 5.5 I human mykologi
    • 5.6 Dyrmykologi
    • 5.7 Miljø mykologi
    • 5.8 Industriell mykologi
    • 5.9 Plant mykologi
  • 6 Referanser

fundament

Sabouraud dextrose agar er et medium som i sin opprinnelige formulering er svakt selektiv, på grunn av sin sure pH på 5,6 ± 0,2, kan imidlertid bakterier fortsatt utvikle seg, hovedsakelig ved langvarig inkubasjon.

Mediet inneholder kaseinpepton og bukspyttkjertel fordøyd dyrvev, som gir karbon og nitrogenkilden for utvikling av mikroorganismer.

Den inneholder også en høy konsentrasjon av glukose, som fungerer som en energikilde, favoriserer veksten av sopp over bakterier. Alle blandet med agar-agar, en komponent som gir riktig konsistens.

På den annen side kan Sabouraud dextrose agar være selektiv hvis antibiotika blir tilsatt.

Med antibiotika er det spesielt nyttig i sårprøver, åpne sår eller noen prøve der det er mistanke om stor bakteriell forurensning.

Mest brukte kombinasjoner av Sabouraud dextrose agar med antibiotika

-Sabouraud agar med kloramfenikol: Ideell for gjenvinning av gjær og filamentøse sopp.

-Sabouraud-agar med gentamicin og kloramfenikol: på denne måten blir de fleste filamentøse sopp og gjær, og hemmer et stort antall bakterier, inkludert Enterobacteriaceae, Pseudomonas og Staphylococcus.

-Sabouraud med sykloheksimid: er spesielt nyttig for prøver fra hud eller luftveiene, så lenge det er mistanke dimorf sopp.

Cycloheximid skal brukes med forsiktighet; selv om det brukes for å hemme veksten av sopp og gjær miljømessig ikke-patogen, eller som kan være til stede som forurensninger i en prøve, også det hemmer veksten av visse sopper som Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp og andre opportunistiske sopp.

-Sabouraud agar med kloramfenikol pluss cycloheximid: brukes hovedsakelig for å isolere dimorfe dermatofytter og sopp. Det har ulempen at det hemmer noen arter av opportunistiske sopp som Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes eller C. neoformans.

-Sabouraud-agar med kloramfenikol, streptomycin, penicillin G og cykloheksimid: er ideell for ekstremt prøver som var kontaminert med bakterier og saprophytic sopp, men har den ulempe at de hemmer veksten av Actinomyces og Nocardias, i tillegg til de opportunistiske soppene som er nevnt ovenfor.

forberedelse

Hvis du har ingrediensene separat, kan du klargjøre det på følgende måte:

Dextrose agar Sabouraud 

Regret:

- 40 gr dextrose

- 10 g pepton

- 15 g agar-agar

- Mål 1000 ml destillert vann

Alle ingrediensene er blandet, pH justeres til 5,6. Løs opp løsningsmidlene ved å koke, fordel 20 ml av mediet i rør med 25 x 150 mm, uten flens og helst med bomullstopp.

Andre rørstørrelser kan også brukes, avhengig av tilgjengelighet.

De autoklaveres i 10 minutter ved en trykkatmosfære (121 ° C). Ikke overskride autoklaveringstiden. Når du forlater autoklaven, vippes rørene med en støtte til de stivner i en fløyt-topp..

En annen måte er å oppløse ingrediensene ved oppvarming til det kokes. I samme autoklave fiola i 10 minutter og fordel deretter 20 ml i petriskål.

Hvis du har en Sabouraud dextrose agar medium som allerede inneholder alle ingrediensene, fortsetter vi til tross for spesifisert av handelshuset for en liter vann beløp. De gjenværende trinn er lik de som er beskrevet ovenfor.

Dextrose agar Sabouraud (modifikasjon av Emmons)

Regret:

-  20 gr dextrose

- 10 g pepton

-  17 g agar-agar

-  Mål 1000 ml destillert vann

Alle ingrediensene er blandet, pH justeres til 6,9. Fortsett på samme måte som i forrige tilfelle.

Det er kommersielle hus som tilbyr medium med alle ingrediensene. I dette tilfellet veier og klargjør som beskrevet i innsatsen.

Sabouraud dextrose agar (modifikasjon av Emmons) med kloramfenikol

Kloramfenikol stamløsning

- Veie 500 mg kloramfenikolbase

- Mål 100 ml 95% etanol

- bland

Sabouraud dextrose agar-mediumet (Emmons) fremstilles som beskrevet ovenfor, og i tillegg til hver liter medium tilsetter man 10 ml kloramfenikol stamløsning før autoklavering..

Dextrose agar Sabouraud Emmons med cykloheximid

Sykloheximid stamløsning

- Veid 5 g cykloheximid

- Mål 100 ml aceton

- bland

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) fremstilles som allerede beskrevet og i tillegg til hver liter medium tilsetter 10 ml cykloheximid stamløsning før autoklavering.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) med kloramfenikol og cykloheximid

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) fremstilles som allerede beskrevet, og ytterligere per liter medium Tilsett 10 ml kloramfenikol lageroppløsning og 10 ml sykloheksimid stamoppløsning før autoklave.

Andre antibiotika som kan legges til

20.000 til 60.000 enheter penicillin per liter medium.

30 mg streptomycin per liter medium.

Begge bør inkorporeres etter autoklavering av mediet, svakt avkjølt (50-55 ° C).

0,04 g neomycin per liter medium.

0,04 g gentamicin per liter medium.

Spesielle hensyn

For sikkerhets skyld er foretrukket plante Sabouraud dekstroseagar i kileformede rør (tilbøyelig kanaltopp) i stedet for i petriskåler, for å unngå spredning og inhalering av sporer.

Det er viktig at rør med Sabouraud agar er dekket med bomull og ikke med skruehett, siden det har vist seg at semianaerobiske forhold hemmer dannelsen av sporer i noen stammer, for eksempel Coccidioides immitis. I tillegg er de fleste sopp aerobic.

Hvis du bruker en skruehett, må du ikke lukke tett.

Kvalitetskontroll

De forberedte medier må ha kvalitetskontroll for å verifisere at de fungerer tilfredsstillende. Til dette formål blir visse kontrollstammer sådd.

For Sabouraud kan dextroseagar med kloramfenikol ATCC-stammer brukes. Candida albicans, som må ha god vekst. En annen plate er inokulert med stammer av Escherichia coli, må være helt hemmet.

En uninoculated plate inkuberes der ingen mikroorganisme skal vokse.

Sabouraud dextrose agar med kloramfenikol og cykloheximid kan brukes stammer av  Trichophyton mentagrophytes, må utvikle seg bra. En annen plate er inokulert med en belastning på Aspergillus flavus, der det må være liten vekst eller ingen vekst. I tillegg inkuberes en ikke-injisert plate for å demonstrere dens sterilitet.

For Sabouraud dextrose agar med cykloheximid, stammer av Candida albicans, Trichophyton rubrum  eller Microsporum canis, som skal vise god vekst.

På samme måte en stamme av Aspergillus flavus, viser liten vekst eller ingen vekst. Til slutt inkuber en uninoculated plate for sterilitetskontroll.

søknader

Primær dyrking

Classic Sabouraud dextrose agar inneholder 4 gram dextrose og er utmerket som et primært isolasjonsmedium, siden det viser den karakteristiske morfologien til hver sopp.

Det er også utmerket å demonstrere produksjon av pigmenter. Det er imidlertid ikke den mest hensiktsmessige måten å observere sporulering.

Det er heller ikke anbefalt å vokse Blastomyces dermatitidis, som hemmer av den høye konsentrasjonen av glukose tilstede.

På den annen side må visse hensyn tas i betraktning for dyrking.

Noen sopp utvikler seg bedre ved romtemperatur, for eksempel mugg, andre utvikler seg vellykket ved 37 ° C, som noen gjær, og andre kan utvikle seg ved begge temperaturer (dimorfe sopp).

Derfor, er det noen ganger nødvendig å bruke flere Sabouraud-agar-plater for en enkelt prøve, fordi ofte utført sådd ut i duplikat for inkubering av en plate ved romtemperatur og en annen ved 37 ° C.

For eksempel, Sporothrix schenckii det er sådd i to plater; ett ble inkubert ved romtemperatur for å oppnå den fase av den andre formen og inkubert ved 37 ° C for den gjær-fase, men den sistnevnte er nødvendig for å legge til 5% blod til middels.

I andre tilfeller, som i prøver av mycetomer, blir to plater av Sabouraud agar sådd, en med kloramfenikol og den andre med cykloheximid. Den første tillate vekst av forårsakende midler av fungal opprinnelse mycetoma (Eumycetoma) og det annet forårsakende midler av bakteriell opprinnelse mycetomas som actinomycetomes.

sporulation

Dextrose Sabouraud agar modifisert av Emmons inneholder 2 gram dextrose og brukes ikke bare til isolasjon, men også for sporulering og bevaring av sopp.

I dette mediet hvis du kan gjenopprette stammer av Blastomyces dermatitidis.

bevaring

For å bevare svampekulturer kan lagres i kjøleskap (2-8 ° C). Lagringstiden kan variere mellom 2 til 8 uker. Etter denne tiden må de bli subcultured for å gjenta prosessen.

Noen sopp er best vedlikeholdt ved romtemperatur, for eksempel Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum og Microsporum audounii.

Kan forlenge vedlikehold av stammen for å unngå pleomorphism hvis fullstendig eliminert dextrose agar, og hvis mengden av agar-mediet blir redusert for å forhindre tørrhet.

mikrokulterer

For å identifisere noen filamentøse sopp er det nødvendig å utføre mikrokulturer ved bruk av Sabouraud agar eller andre spesielle midler for å observere strukturer av seksuell og aseksuell reproduksjon.

I menneskelig mykologi

Det brukes hovedsakelig for diagnostisering av soppsykdommer, spesielt de som påvirker huden og dets vedlegg (hår og negler).

Prøver kan være sekreter, ekssudater, hud, hår, negler, sputum, CSF eller urin. Sykdommene som ofte er isolert, er dermatofytter, sopp som forårsaker subkutane og systemiske soppinfeksjoner.

Dyr mykologi

Dyr er ofte påvirket av soppinfeksjoner, så Sabouraud agar er like nyttig i dyr som i human mykologi..

For eksempel kan dermatofytter ofte påvirke dyr. Slik er tilfellet av Microsporum canis var forvrengt, som ofte smitter hunder, katter, hester, griser og aper. også, Microsporum gips infiserer hunder, katter og storfe.

Fugler som kyllinger, roosters og kyllinger påvirkes av Microsporum gallinae.

Andre sopp, som Zymonema farciminosum, de er også en årsak til sykdom hos dyr, hovedsakelig i hester, muldyr og esler, som produserer en viktig betennelse i lymfekarrene.

Sporothrix schenkii og Histoplasma capsulatum påvirker husdyr og mennesker.

Miljø mykologi

Mange patogene eller opportunistiske sopp kan konsentreres til enhver tid i et gitt miljø, spesielt i operasjonsrom og Intensive Care Units (ICU) på klinikker og sykehus. Derfor er det nødvendig å kontrollere dem.

Andre sårbare rom er biblioteker og gamle bygninger, som kan påvirkes av konsentrasjonen av miljøsvamp.

I miljøstudier brukes Sabouraud dextrose agar til isolering av sopp.

Industriell mykologi

Sabouraud dextrose agar kan ikke mangle for studier av soppkontaminanter i produksjon av kosmetikk, mat, drikkevarer, lær, tekstiler, blant annet.

Plant mykologi

Planterne lider også av sykdommer forårsaket av sopp, som påvirker ulike deler av planten, noe som til og med kan stoppe høsten, forårsaker store tap i landbruket.

referanser

  1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikrobiologisk diagnose av mykoser og følsomhetsstudier til antifungale stoffer. Anbefalinger fra det spanske samfunnet av smittsomme sykdommer og klinisk mikrobiologi. Tilgjengelig på: coesant-seimc.org
  2. ValteK Laboratory. (2009). Sabouraud dextrose agar med cykloheximid. Tilgjengelig på: andinamedica.com.
  3. Navarro O. (2013). Veterinær mykologi. National Agrarian University. Nicaragua.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial
  5. Casas-Rincon G. Generell mykologi. 1994. 2. utg. Universidad Central de Venezuela, Bibliotek utgaver. Venezuela, Caracas.