Agarblodfundament, bruk og forberedelse

den blod agar det er et beriket fast medium, differensial men ikke selektiv. Den brukes til utvinning og vekst av et stort utvalg av mikroorganismer fra kliniske prøver eller subkulturer.

Klassisk blodagar bør inkluderes for såing av de fleste kliniske prøver mottatt i laboratoriet; bortsett fra avføring prøver hvor det ikke er nyttig, med mindre forberedt med visse modifikasjoner.

Dette dyrkningsmediet er i utgangspunktet sammensatt av en beriket basaragar og 5% blod. Basen av agar kan variere i henhold til behovene, men vil hovedsakelig bestå av peptoner, aminosyrer, vitaminer, kjøttekstrakt, natriumklorid, agar, blant andre.

Når det gjelder blod, er det vanligvis nødvendig å ha kontakt med et bioterium for å skaffe blod fra dyr, som får, kanin eller hest. Dette er imidlertid ikke alltid mulig, og til tider benyttes menneskelig blod.

Blodagarmediet kan fremstilles i laboratoriet eller kan kjøpes klar for selskaper som er dedikert til det. Utarbeidelsen av dette mediet er en av de mest delikate, noe uforsiktig i forberedelsen vil resultere i en forurenset sats.

Derfor bør alle mulige forholdsregler tas, og til slutt bør en kvalitetskontroll gjøres ved inkubering ved 37 ° C 1 plate for hver 100 som er forberedt.

index

• 1 Foundation
• 2 bruksområder
  • 2.1 Valg av blodtype
  • 2.2 Valg av base agar type
  • 2.3 Bruk av blodagar i henhold til basemediet som brukes til dets fremstilling
• 3 Fremstilling
  • 3.1 Vekt og oppløs
  • 3,2 sterilisere
  • 3.3 Aggregering av blod
  • 3.4 Hell inn petriskålene
• 4 referanser

fundament

Det har allerede blitt nevnt at blodagar har egenskapen for å være et beriket, differensielt og ikke-selektivt medium. Kjelleren av hver av disse egenskapene er forklart nedenfor.

Blodagar er et beriket medium fordi det har som hovedadditiv 5 -10% blod på en agarbase. Begge stoffene inneholder mange næringsstoffer, og denne egenskapen tillater de fleste dyrkbare bakterier å vokse i den.

At veksten skjer uten begrensning; Av denne grunn er det ikke-selektivt. Imidlertid, hvis forbindelser blir tilsatt til dette medium som forhindrer veksten av noen mikroorganismer og favoriserer veksten av andre, blir den selektiv. Dette er tilfellet hvis visse typer antibiotika eller antifungale stoffer blir tilsatt.

På samme måte er blod agar et differensielt medium, siden det gjør det mulig å skille mellom tre typer bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolytisk og gamma-hemolytisk..

Beta-hemolytisk er slike som har evne til lysering eller bryte fullstendig røde blodceller, som danner en klar ring rundt koloniene, således frembringe hemolyse eller ß ß -hemólisis og mikroorganismer som er kalt beta-hemolytiske.

Eksempler på ß-hemolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes og Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolytikken er de som utfører delvis hemolyse, hvor hemoglobin oksyderes til metemoglobin, noe som gir en grønn farging rundt koloniene. Dette fenomenet kalles hemolyse a eller a-hemolyse og bakteriene er klassifisert som a-hemolytisk.

Eksempel på a-hemolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae og Streptococcus av gruppen viridans.

Til slutt er det bakteriene kalt gamma-hemolytisk eller ikke-hemolytisk. Disse vokser på agar uten å generere endringer på den, en effekt kjent som γ-hemolyse, og mikroorganismer er y-hemolytisk.

Eksempel på y-hemolytiske bakterier: Noen stammer av Streptococcus fra gruppe D (Streptococcus bovis og Enterococcus faecalis).

søknader

Blodagararkulturmediet er en av de mest brukte i mikrobiologilaboratoriet.

Blant mikroorganismene som er i stand til å vokse i agar medium blod er: strenge aerobe bakterier, fakultativ, mikroaerofile, anaerob, Gram-positive eller Gram-negative bakterier raskt voksende eller langsomt voksende.

Noen bakterier som er krevende eller plagsomme fra næringsmessig synspunkt, så vel som sopp og gjær, vokser også. På samme måte er det nyttig å subkulturere eller reaktivere stammer som er svært svake metabolske.

Valget av blodtype og baseagar varierer imidlertid avhengig av den sannsynlige mikroorganismen som er mistenkt for utvinning og bruk av plakk (kultur eller antibiogram)..

Valg av blodtype

Blodet kan være lam, kanin, hest eller menneske.

Den mest anbefalte er lammet blod, med noen unntak. For eksempel, for å isolere Haemophilus-arter, hvor det anbefalte blodet er hest eller kanin, siden lamblod har enzymer som hemmer faktor V.

Det minste anbefales det menneskelige, men det er det mest brukte, kanskje fordi det er lettest å skaffe seg. 

Blodet må defibrineres, oppnås uten noen form for additiv og fra friske dyr. For bruk av menneskelig blod må flere faktorer tas i betraktning:

Hvis blodet kommer fra personer som har lidd bakterielle infeksjoner, vil de ha spesifikke antistoffer. Under disse forholdene er det sannsynlig at veksten av noen bakterier vil bli hemmet.

Hvis det er hentet fra blodbanen, inneholder det citrat og det er mulig at visse bakterier ikke utvikler seg i sin nærhet. På den annen side, hvis blodet kommer fra pasienter som tar antibiotika, kan veksten av følsomme bakterier hemmes.

Og hvis blodet er fra en diabetiker, forstyrrer overflødig glukose den rette utviklingen av hemolysemønstre.

Valg av base agar type

Basaragar brukt til fremstilling av blodagar kan være svært bred. Blant dem er de: nærings agar, hjerne hjerte infusjon agar, trypticase soya agar, Mueller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar agar Brucella, Campylobacter agar, etc..

Bruk av blod agar i henhold til basemediet som brukes til dets fremstilling

Næringsstoffer agar

Denne basen er minst brukt, fordi den vil vokse i hovedsak ikke-krevende bakterier, slik som enteriske baciller, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blant annet. Det anbefales ikke å isolere Streptococcus.

Hjertehjerneinfusjonsagar (BHI)

Det er en av de mest brukte som grunnlag for blodagar, fordi den har de nødvendige næringsstoffene for veksten av de fleste bakterier, inkludert Streptococcus sp og andre krevende bakterier. Selv om det ikke er hensiktsmessig å observere mønstre av hemolyse.

Lamblod brukes vanligvis med denne basen.

Blod agarvarianter kan også fremstilles, hvor andre forbindelser blir tilsatt for å isolere visse mikroorganismer. For eksempel tjener hjernehjerteinfusjonsagar, supplert med kaninblod, cystin og glukose, til å isolere Francisella tularensis.

Mens det med cystint Telluritt er nyttig for isolering av Corynebacterium diphteriae. Du kan bruke humant eller lammet blod.

Med den første vil beta-hemolyse se ut som en smal halo, mens med den andre vil haloen bli mye bredere.

På samme måte benyttes denne basen sammen med bacitracin, maisstivelse, hesteblod og andre tilsetningsstoffer (IsoVitaleX), for isolering av slekten Haemophilus sp fra åndedrettsprøver.

Likeledes, hvis tilsettes kombinasjonen av antibiotika kloramfenikol - gentamicin eller penicillin - streptomycin hesteblod, er det ideelt for isolering av patogene sopper krevende, og med overlegen ytelse til Sabouraud-glukose-agar. Det er spesielt nyttig i isoleringen av Histoplasma kapulatum.

Tryptiv soyabønne

Denne basen er den mest anbefalte for bedre observasjon av mønsteret av hemolyse og utførelsen av diagnostiske tester som taxa av optokin og bacitracin. Det er den klassiske blodagar som brukes rutinemessig.

Med denne basen kan du også lage den spesielle blodagar for Corynebacterium diphteriae, med tellurcystin og blod av lam.

På samme måte er kombinasjonen av denne agar med lammeblod pluss kanamycin-vancomycin ideell for veksten av anaerober, spesielt Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Denne basen suppleres med blod brukes til å utføre antibiotikken til krevende mikroorganismer, for eksempel Streptococcus sp.

Det er også nyttig for isolering av bakterier som Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Dette mediet er ideelt som en base for blodagar når Neisseria-slekten er mistenkt, spesielt Neisseria meningitidis, som N. gonorrhoeae vokser ikke på blodagar.

Det tjener også til å utføre følsomhetstester til Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Denne basen er utmerket for såing prøver av gastrisk biopsier på jakt etter Helicobacter pylori.

Mediet ble fremstilt ved å tilsette 7% defibrinert saueblod med antibiotika (vancomycin, trimetoprim, amfotericin B og cefsulodin) for å begrense veksten av andre bakterier som kan være til stede.

Denne samme base som er supplert med humant eller lammeblod, nalidixsyre og kolistin er nyttig for isolering Gardnerella vaginalis. Det er også ideelt for å vurdere antimikrobiell susceptibilitet mot antibiotika av samme mikroorganisme.

I tillegg er det brukt til fremstilling av blodagar for dyrking av anaerober, tilsetting av aminoglykosider og vankomycin.

Denne basen tillater oss å observere mønstrene av hemolyse riktig.

Brucella Agar

Dette mediet som brukes som basis for blodagar sammen med tilsetning av vitamin K, er ideelt for dyrking av anaerobe bakterier. I dette tilfellet anbefales bruk av lamblod.

Campylobacter agar

Campylobacter agar supplementert med 5% saueblod og fem antibiotika (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, polymyxin B og vancomycin), er det medium som brukes til å isolere Campylobacter jejuni i avføringprøver.

forberedelse

Hvert kommersielt hus bringer på baksiden av pakken instruksjonene for å forberede en liter kulturmedium. Tilsvarende beregninger kan gjøres for å forberede den ønskede mengde, i henhold til den valgte basisagar.

Vekt og oppløs

Basar agar kommer dehydrert (pulver), så det må oppløses i destillert vann justert til pH 7,3.

Mengden som er angitt av den valgte baseagar, veies og oppløses i den tilsvarende mengde vann i en fiola, oppvarmes deretter til en moderat varme og blandes med roterende bevegelser til alt pulveret er oppløst..

sterilisere

Når det er oppløst, steriliseres det i en autoklav ved 121 ° C i 20 minutter.

Sammensatt av blod

Når du forlater autoklaven, la fiolaen kjøle ned til temperaturen svinger mellom 40 og 50 ° C; er en temperatur som menneskelig hud støtter og samtidig har agaret ikke stivnet.

For dette blir fiola berørt med hånden, og hvis varmen er tolerabel, er den den ideelle temperaturen for å legge til tilsvarende mengde defibrinerte blod (50 ml per liter agar). Bland forsiktig med å homogenisere.

Gjennomgangen av blodets aggregat er avgjørende, fordi hvis det er gjort når mediet er veldig varmt, vil de røde blodlegemer bryte og mediet vil ikke tjene til å observere hemolyse.

Hvis det legges for kaldt, dannes klumper, og overflaten av mediet vil ikke være glatt for å gjøre fløyten riktig.

Hell inn petriskål

Serveres i sterile petriskål umiddelbart etter homogenisering av blodet. Ca 20 ml helles i hver petriskål. Denne prosedyren utføres i en laminar strømnings hette eller nær lighteren.

Når du serverer blodagar i Petriskålene, bør ingen luftbobler forbli på overflaten av platen. Hvis dette skjer, går flammen til Bunsen-brenneren raskt over platen for å eliminere dem..

Platen får stivne og lagres i kjøleskap (2-8 ° C) invertert til bruk. Før du bruker blodagarplattene, skal de herdes (la dem ta romtemperatur) som skal såddes.

De tilberedte platene varer ca 1 uke.

referanser

1. Bayona M. Mikrobiologiske forhold for dyrking av Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2. utgave. UCA Publikasjonstjeneste.
3. "Agarblod." Wikipedia, Den frie encyklopedi. 10. desember 2018, 14:55 UTC. Des 27 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Tilgjengelig på: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..