Soy agar tripticaseína foundation, forberedelse og bruk

den trypticasein soya agar eller tryptikase soyagar er et fast, ikke-selektivt og næringsrikt kulturmedium. Det er utpekt med bokstavene TSA for dets akronym i engelsk Trypticase Soy Agar. Den består av triptein, soypepton, natriumklorid og agar-agar.

På grunn av sin høye næringsevne er den ideell for dyrking av moderat krevende og ikke-krevende mikroorganismer. Mediet uten ekstra kosttilskudd anbefales ikke for primære kulturer, men det er veldig nyttig for subculturing rene stammer og holder dem levedyktig, blant annet bruksområder.

Dessuten tjener denne agar som grunnlag for fremstillingen av audiovisuelt innhold som blodagar, særlig når det er nødvendig å overholde de mønstre av hemolyse og for montering arter optochin og bacitracin, som kreves i diagnosen av Streptococcus pneumoniae og Streptococcus pyogenes henholdsvis.

Dessuten, når de kombineres med antibiotika er det nyttig å isolere og strenge fakultative anaerobe mikroorganismer av klinisk betydning fra prøver med blandet flora.

Til slutt oppfyller sammensetningen av tripticasein soyagar og dens ytelse kravene fastsatt av de forskjellige farmakopéene (europeisk, japansk og nordamerikansk).

index

• 1 Foundation
• 2 Fremstilling
  • 2.1 Tripticasein soya agarplater
  • 2.2 Tripticasein soya agarplater suppleres med blod
  • 2.3 Tripticasein soya agarplater suppleres med oppvarmet blod
  • 2.4 Wedges av tripticasein soya agar
• 3 bruksområder
• 4 Seeded
• 5 Kvalitetskontroll
  • 5.1 Sterilitetskontroll
  • 5.2 Vekstkontroll
  • 5.3 Kontroll av vekst og mønster av hemolyse av tripticasein soya agar suppleret med blod
• 6 Referanser

fundament

For riktig utvikling av bakterier er det nødvendig med tilstedeværelse av energibidrag, slik som aminosyrer, vitaminer, purinbaser og pyrimidiske.

I denne forstand gir triptein og soypepton disse næringsstoffene til mikroorganismer, slik at de får full utvikling. For krevende bakterier er det imidlertid nødvendig å supplere denne agar med defibrinert blod eller oppvarmet blod for å øke sin anrikning.

På den annen side, hvis antibiotika blir tilsatt til mediet, blir det et selektivt medium. Du kan også legge til 0,6% gjærekstrakt for å favorisere isolasjonen av arter av slekten Listeria, mens du tilsetter cystint Telluritt og Lammet blod er ideelt for Corynebacterium diphteriae.

Endelig gir natriumklorid den osmotiske balansen til mediet, og agar gir den faste konsistensen.

forberedelse

Tripticasein soya agarplater

For å fremstille trypticasein soyagar bør 40 gram av det dehydrerte kommersielle medium veies i digital skala. Oppløses i en liter destillert vann inneholdt i en fiola.

Blandingen får stå i 5 minutter og bringes så til en varmekilde for å hjelpe til i oppløsningen av mediet. Det bør omrøres ofte og la det stå i 1 eller 2 minutter. Deretter steriliseres mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

La avkjøles til 50 ° C og fordeles i sterile petriskål. La solidify, invert, bestille i plaquers og lagre i kjøleskap.

Den endelige pH i mediet bør være 7,3 ± 0,2.

Det bør tas hensyn til at fargen på det dehydrerte kulturmediet er lys beige og skal lagres mellom 10 og 35 ° C, på et tørt sted.

For sin del er den forberedte agar lysegul. Forberedte plater skal oppbevares i kjøleskap (2 til 8 ° C) til bruk.

Plattene må nå romtemperatur før de brukes.

Tripticasein soya agarplater suppleres med blod

Blodagar er fremstilt ved å tilsette 5% defibrinert blod på tidspunktet for avkjøling av trypticasein soyagar ved 50 ° C. Blandingen homogeniseres ved å rotere med milde bevegelser.

Server i de sterile petriskålene. Fargen på mediet skal være kirsebærrød.

Tripticasein soya agarplater suppleres med oppvarmet blod

For å fremstille den blodagar basen TSA er nødvendig for å gjennomføre fremgangsmåtene beskrevet ovenfor, men som forlater autoklaven får lov til å stå inntil temperaturen i mediet er ca. 56 til 70 ° C. På den tiden blir blodet plassert og blandet til mediet blir brun.

Server i sterile petriskål. Farge på mediet er sjokoladebrunt.

Wedges av tripticasein soya agar

Fremstillingsprosessen for agaren er som beskrevet for plater, med den forskjell at i stedet for å tjene mediet på Petri-skåler, fordelt mellom 10 12 ml rør med lokk bakelitt før autoklave.

Deretter autoklaveres rørene ved 121 ° C i 15 minutter. Når de forlater, lene de seg ved hjelp av en støtte og tillate seg å størkne.

De forberedte kilene blir sådd av overflate og tjener til å opprettholde visse ikke-krevende levedyktige mikroorganismer, for en bestemt tid.

søknader

Trypticasein soya agar brukes i følgende tilfeller:

-Som en base for å forberede den klassiske blodagar som brukes rutinemessig i de fleste laboratorier.

-Isoleringen av krevende bakterier.

-Observasjon av mønsteret av hemolyse.

-Utførelse av diagnostiske tester.

-Som grunnlag for å lage spesiell blodagar for Corynebacterium diphteriae, med tellurcystin og blod av lam.

-Som grunnlag for å forberede lamblodagar, kan mer kanamycin-vancomycin for vekst av anaerobe, spesielt Bacteroides sp.

-For vedlikehold av ikke-krevende stammer (Bacterioteca).

-Mikrobiell aerob telle i den mikrobielle grenseundersøkelsen av vann, miljø, mat og kosmetikkprøver.

plantet

Prøver kan podes direkte på overflaten av trypticasein soya agar tilsatt blod eller andre tilsetningsstoffer. Det blir sådd av utmattelse.

Mens tripticasein soyagarplater uten tilsetningsstoffer generelt brukes til subkulturmikrobielle stammer (bakterier eller gjær).

Kvalitetskontroll

Sterilitetskontroll

For å kontrollere sterilitet av de forskjellige media fremstilt med soya agar Trypton basis anbefales at: hver fremstilte sats må inkuberes 1 eller 2 ikke-inokulerte plater eller rør ved 37 ° C i 24 timer for å bevise sterilitet. I alle tilfeller må det forbli uten vekst.

Hvis det finnes forurensning, må hele partiet kasseres.

Vekstkontroll

For å studere riktig funksjon av trypticasein soya agar, kan følgende bakteriestammer brukes: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 og Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Stammene blir sådd og inkubert i aerobiose ved 37 ° C i 24 timer.

I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende.

Du kan også bruke sopp som komplekset Candida albicans ATCC 10231 og Aspergillus niger ATCC 16404. God vekst forventes for begge stammer.

Vekstkontroll og hemolyse mønster av tripticasein soya agar suppleres med blod

For å verifisere riktig funksjon av blodagar, utarbeidet med denne basen, kan følgende stammer brukes: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 og Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

De blir sådd og inkubert ved 37 ° C i microaerophilicus i 24 timer.

I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende, med tanke på at i S. pyogenes beta-hemolyse (tydelig halo rundt kolonien) og i begge stammer av S. pneumoniae alfa hemolyse (grønn halo rundt koloniene) bør observeres.

referanser

1. Wikipedia bidragsytere. Trypticase Jeg er agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. desember 2018, 15:47 UTC. Tilgjengelig på: https://en.wikipedia.org
2. Laboratorier Britania. Trytein soya agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Soyabønne triptych. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
5. BD Laboratories Trypticase Jeg er agar. 2014. Tilgjengelig på: .bd.com