Agar TCBS grunnlag, forberedelse og bruk



den TCBS agar er et svært selektivt og differensielt fast kulturmedium som brukes til isolering og kultur av Vibrio-bakterier, spesielt Vibrio cholerae, V. vulnificus og V. parahaemolyticus som store patogener av dette slaget.

Akronymet TCBS betyr tiosulfatcitratgallsukkrose. Denne agar er også kjent som det selektive mediet for Vibrios. Den opprinnelige formelen ble opprettet av Nakanishi og senere endret av Kobayashi.

Den består av gjærekstrakt, kjøttpepton, triptein, natriumcitrat, natriumtiosulfat, oksegalle, sukrose, natriumklorid, ferriscitrat, bromtymolblått, tymolblått og agar.

Denne sammensetning tillater en tilstrekkelig utvikling av Vibrio-artene fra vann, avføring og matprøver; bortsett fra Vibrio hollisae, det vokser ikke i dette mediet. I tillegg er TCBS-mediet i stand til å hemme veksten av andre medfølgende bakterier, spesielt coliformer.

På grunn av de alvorlige gastrointestinale og ekstraintestinale problemer som noen arter av slekten Vibrio produserer, er diagnosen svært viktig. Mennesket er smittet hovedsakelig ved forbruk av rå eller underkokt sjømat eller forurenset vann, men også gjennom smitte av sår.

På grunn av dette bør kliniske laboratorier inkludere TCBS-agar i studiet av avføringskulturer av prøver med flytende avføring, spesielt med utseendet på risvann. Spesielt hvis pasienten rapporterer å ha vært i kontakt med sjøvann eller har konsumert sjømat eller fisk.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 Bruk
  • 4 Seeded
  • 5 Begrensning
  • 6 Kvalitetskontroll
  • 7 referanser

fundament

Gjærekstrakt, kjøttpeptoner og triptein er næringsmiddelkilden til dette mediet. Imidlertid er TCBS agar et ugjestmild medium for de fleste bakterier.

Den høye selektiviteten er gitt ved tilsetning av natriumcitrat og oksegalle; begge er hemmende midler som også gir en alkalisk pH til mediet, begrenser veksten av den medfølgende flora og favoriserer veksten av V. cholerae, blant andre arter. Det bør bemerkes at Vibrio cholerae er veldig følsom for halsbrann.

For sin del balanserer natriumklorid osmotisk til mediet. I tillegg, da konsentrasjonen er høy, virker den også som et inhibitormiddel, som favoriserer veksten av halofile bakterier.

Sukrose er det gjærbare sukker som sammen med de blå pH-indikatorene for bromothymol og tymolblått gir differensial karakter til mediet. Av denne grunn betyr det med dette at det er mulig å differensiere sukrosefermentestammer fra ikke-fermenterende stammer.

Koloniene av sukrosefermenterende stammer utvikler en gul farge og vil snu mediet fra grønt til gult på grunn av produksjonen av syrer. De ikke-fermentorer vokser gjennomskinnelig og mediet forblir den opprinnelige farge (grønn).

På samme måte inneholder dette medium natriumtiosulfat som en kilde til svovel og ferriscitrat som et avslørende middel. Begge viser bakteriene som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass). H2S er dannet fra tiosulfatet og senere reagerer med ferriscitrat dannes et synlig svart bunnfall.

Endelig er agar det som gir den faste konsistensen til mediet.

forberedelse

Veid 89 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Hjelp oppløsning ved oppvarming og hyppig omrøring. Blandingen kan kokes i 2 minutter.

Dette mediet autoklaverer ikke. Etter oppløsningen serveres den direkte på sterile plater. Når de størkner, er de ordnet på en invertert måte i plakkmakere og oppbevart i kjøleskap (2-8 ° C) til de brukes.

Mediet etter tilberedning bør være ved pH 8,6 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige eller grønn-beige, og fargen på mediet er skoggrønn eller blåaktig grønn.

Det er viktig å la platene herdes før du sår prøvene.

bruk

Det vanligste prøven for isolering av Vibrios er diaréstoler.

Krakkprøver hvis de ikke kan frøes umiddelbart på selektivt medium, må transporteres midt i Cary Blair.

For å øke følsomheten til kulturen kan fecesen passeres gjennom peptonvann ved pH 8,4 som et anrikningsmedium i maksimalt 8 timer, derfra blir det subkultivert til TCBS-mediet..

Det må også tas i betraktning at enkelte stammer av Vibrios kan forårsake sepsis hos immunsuppressive pasienter, slik at de kan isoleres fra blodkulturer. På samme måte kan prøver av vann og mat fra sjøen analyseres når det er epidemisk utbrudd av kolera sykdom.

plantet

Inokulumet i prøven under studien må være fremtredende, såing utføres ved metoden for strikking ved utmattelse. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiosis.

De presumptive koloniene av Vibrio cholerae De er mellomstore, glatte, ugjennomsiktige, med tynne kanter og gule fordi de syrer sukrose..

På en lignende måte, arten av V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii og noen V. vulnificus. Andre arter av Vibrios klinisk viktige som V. parahaemolyticus Ikke gjær sukrose, utvikle som olivengrønne kolonier.

På den annen side må vi huske på at enkelte stammer av aeromonas og plesiomonas som er oksidase (+) kan vokse i dette mediet, utvikler gule kolonier som kan forvirre klinikeren. Mens noen stammer av Pseudomonas også oksidase (+) vokser som grønne kolonier så vel som V. parahaemolyticus.

begrensning

Oxidasetesten som er positiv for slekten Vibrio, skal aldri utføres fra kolonier oppnådd fra TCBS-agar, da resultatet blir en falsk negativ. Forbindelsene i mediet interfererer sterkt i denne testen. Derfor bør det gjøres fra subkulturer på blodagar.

Kvalitetskontroll

For å bevise at mediet er i god stand, er det tilrådelig å plante kjente eller sertifiserte kontrollstammer og observere om veksten oppfyller forventede egenskaper.

For dette, stammer av:

-Vibrio cholerae - Tilfredsstillende vekst (gule kolonier, gjennomsiktig grense).

-Vibrio parahaemolyticus - Tilfredsstillende vekst (koloni med grønt senter og gjennomsiktig grense).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tilfredsstillende vekst (gule kolonier med haloer av samme farge rundt kolonien).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - total eller delvis inhibering (små gule eller gjennomsiktige kolonier).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- delvis eller total inhibering (blå kolonier).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Helt hemmet.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Total eller delvis inhibering. (Små kolonier senter grønn gjennomsiktig kant).

Inkubasjon av et ikke-injisert medium bør ikke ha endring.

referanser

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Tilgjengelig på: f-soria.es
  2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Tilgjengelig på: bd.com
  3. Laboratorier Britania. TCBS Medium. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.