Agar Thayer Martin grunnlag, forberedelse og bruk
den Thayer Martin agar Det er et svært næringsrikt og selektivt fast medium for isolering av Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; både kjent som patogen eller klinisk viktig Neisseria.
En av de viktigste spesielle egenskapene til Thayer Martin agar er det høye innholdet av kosttilskudd. Denne egenskapen er uunnværlig fordi Neisseria er svært krevende mikroorganismer fra næringsmessig synspunkt og derfor ikke vokser i vanlige medier.
På den annen side, fordi disse mikroorganismer normalt finnes i ikke-sterile områder, er tilsetning av inhibitorer som hindrer veksten av den medfølgende flora, uten å påvirke utviklingen av slekten Neisseria..
Denne agar består av GC base agar, hemoglobin, ekstra kosttilskudd og et kompleks av hemmende stoffer (antibiotika og antifungale stoffer). Kommersielle hus selger hvert av kosttilskuddene separat.
Prøven som skal plantes i dette mediet vil avhenge av mikroorganismen som blir søkt. til Neisseria gonorrhoeae De ideelle prøvene er vaginale og uretrale sekresjoner. Mens for Neisseria meningitidis De mest brukte prøvene er CSF, pharyngeal og nasopharyngeal exudates.
index
- 1 Foundation
- 1,1 GC base agar
- 1.2 Hemoglobin
- 1.3 Kosttilskudd
- 1,4 inhibitorer
- 2 Fremstilling
- 2.1 Original Thayer Martin Agar
- 2.2 Agar Thayer Martin endret
- 3 Bruk
- 4 Kvalitetskontroll
- 5 begrensninger
- 6 Referanser
fundament
Neisseriene er mikroorganismer klassifisert som plagsom, og derfor er deres isolasjon vanskelig. Av denne grunn er Thayer Martín et komplekst medium, og hver av komponentene oppfyller en funksjon som forklares nedenfor:
GC-kjerneagar
GC agar inneholder proteosepepton, majsstivelse, natriumklorid, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat og agar-agar. Komponentene gir de grunnleggende næringsstoffer for mikrobiologisk vekst, nøytralisere toksiske fettsyrer bidra til å opprettholde osmotisk balanse, definerer den pH-verdi og tilveiebringe konsistensen til det faste medium.
hemoglobin
Hemoglobin gir faktorene V og X (henholdsvis nikotinamid adenin-dinukleotid NAD og hemin). Derfor, i dette miljøet, vokser også Haemophilus arter. Hemoglobin kan oppnås kommersielt i dehydrert form, eller friskt defibrert bovint blod kan tilsettes til mediet.
Kosttilskudd
Dessuten vil den gjennomsnittlige Thayer-Martin også tilsette et supplement berikelse, fordi de næringsstoffene som inneholdt agar-basen er ikke tilstrekkelig for de krav som av slekten Neisseria.
Det mest brukte anriknings-supplementet kalles isovitalex. Denne inneholder glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanin, ferrinitrat, p-aminobenzosyre, vitamin B12, tiamin og glukose. Alle disse forbindelsene er nødvendige for riktig utvikling av patogene Neisseria.
inhibitorer
Fordi det er et meget næringsrikt medium, må inhibitorer brukes til å forhindre vekst av mikroorganismer av den vanlige floraen i området og dermed favorisere isolasjonen av slekten Neisseria..
Inhibitorkomplekset er sammensatt av vancomycin, colistin og nystatin. Vancomycin hemmer veksten av grampositive bakterier, forhindrer kolistin utvikling av Gram-negative bakterier slik som Pseudomonas og noen saprophytic Neisseria, og Nystatin virker på gjær så Candida albicans.
Imidlertid ble Thayer Martin agar endret; endringene besto i tilsetning av trimethoprim, økningen i mengden agar og tilsetning av ekstra glukose. Disse endringene forbedret betydelig gjenoppretting av arter av Neisseria gonorrhoeae.
Det bør bemerkes at trimetoprim hemmer veksten av Proteus-slekten og dens konsekvente dannelse av swarming. I denne forstand er antibiotika det som gir den selektive naturen til medium Thayer Martin.
forberedelse
Original Thayer Martin Agar
-GC Agar
Veid 8,2 g av dehydrert GC-medium og suspender i 100 ml. Bland og kok i 1 minutt med hyppig omrøring for å oppløse i sin helhet. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
-2% hemoglobin
Suspensér 2 g dehydrert hemoglobin i 2 eller 3 ml varmt destillert vann for å danne en jevn blanding. Tilsett litt etter litt mer vann for å fullføre et volum på 100 ml. Suspensjonen må være homogen før sterilisering.
Steriliser i autoklav i 15 minutter.
-Kosttilskudd
Rekonstituer den kommersielle veien med fortynningsmiddelet som tilbys av samme kommersielle hus. Bland godt. Mengden fortynningsmiddel som skal brukes, vil bli spesifisert i bruksanvisningen..
-Inhiberingssupplement V.C.N (vancomycin, colistin, nystatin)
Rekonstituer hetteglasset med fortynningsmiddelet som leveres av det kommersielle huset. Bland godt. Mengden fortynningsmiddel som skal brukes, vil bli spesifisert i bruksanvisningen..
-forberedt
For hver 100 ml GC-agar fortsett som følger:
Når man forlater autoklaven GC-agar, la den avkjøles til en temperatur på 50 ° C og tilsetning av 2 ml av hemoglobinløsningen fremstilt, Supplement 2 ml anrikning (isobitalex eller britalex), og 2 ml supplement inhibering. Bland og server i sterile petriskål.
Tillat å størkne og lagre i kjøleskap til bruk.
Fargen på det tilberedte mediet er kirsebærrød. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2
Modifisert Thayer Martin Agar
Veid 8,2 g av dehydrert GC-medium og suspender i 100 ml. Tilsett 1 g agar og tilsett 0,3 g glukose. Bland og kok i 1 minutt med hyppig omrøring for å oppløse i sin helhet. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Forbered hemoglobin og anrikningstilskudd som beskrevet ovenfor.
Det anvendte inhibitortillskudd er V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).
-forberedt
Fortsett som beskrevet for den originale Thayer Martin agar.
bruk
Thayer Martin agar bør tempereres før du sår prøvene. De vanlig brukte prøvene er pharyngeal exudates, nasal exudates, vaginal, urethral og / eller rektal sekresjon og CSF..
Bruk nystekte prøver og lag sterk inocula på agar. Prøvene blir sådd direkte av materialutladning og deretter strippet av uttømming på overflaten.
Plater inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i mikroerofil krukke (5% CO2). På slutten av inkubasjonsperioden undersøkes platene for små, grå og noen ganger mukoidlignende kolonier..
Utfør Gram og bekreftende biokjemiske tester til mistenkelige kolonier.
Kvalitetskontroll
For å utføre kvalitetskontrollen av Thayer Martin-agar, kan følgende mikrobielle stammer brukes.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; i begge stammene forventes en tilfredsstillende utvikling.
Følgende stammer bør også inkluderes: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. I alle disse tilfeller forventes en total eller delvis inhibering i dette medium.
begrensninger
-Det må tas i betraktning at bakterier som er resistente mot de anvendte inhibitorer, kan vokse i mediet..
-Det er stammer av Neisseria gonorrhoeae som kan være følsom for konsentrasjonen av vancomycin som brukes. Av denne grunn anbefales det å bruke sjokoladeagar supplert med isovitalex parallelt, men uten hemmere.
-Det resistente stammer av gjær til nystatin som kan vokse på dette mediet og interfererer med isolering av Neisseria patogen, særlig gonokokker.
referanser
- Valtek diagnostiske laboratorier. Agar Thayer-Martin.2016. Tilgjengelig i: com
- Laboratorier Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Tilgjengelig på: britanialab.com
- Wikipedia bidragsytere. Thayer-Martin agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 26. oktober 2017, 16:33 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org4. Tilgang 28. februar 2019.
- Laboratorier Britania. GC agar. 2010. Tilgjengelig på: britanialab.com.
- Laboratorier BBL ™ Medium Enrichment for Fastidious Microorganisms. 1999. Tilgjengelig på: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.