Agar TSI grunnlag, forberedelse og bruk



den TSI-agar eller jern trippel sukker agar er et fast kultur medium som tjener som en biokjemisk test for å lede den første identifikasjonen av Gram-negative baciller. Det er basert på å bevise gjæringen av de tilstedeværende sukkerarter, og produksjon av hydrogensulfid og gass.

Dens sammensetning og fundament er svært lik Kligler jerntest, med forskjellen at sistnevnte inneholder bare glukose og laktose. I stedet, som navnet antyder, inneholder trippeljern jern tre fermentable karbohydrater: glukose, laktose og sukrose..

I tillegg har TSI-mediet fire proteinderivater som gjør det til en veldig næringsrik agar: gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og proteosepepton. Den inneholder også jernholdig ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolrød og agar.

Manglende evne til en mikroorganisme til å gjære glukosen til stede i mediet utelukker det umiddelbart fra å tilhøre Enterobacteriaceae-familien. Derfor er denne testen avgjørende for å avgjøre hvilken identifikasjonsrute som bør tas for å bestemme slekten og arten.

Hvert laboratorium bestemmer om det virker med TSI agar eller Kligler agar agar.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Natriumklorid og agar
    • 1,2 pH-indikator (fenolrød)
    • 1.3 Proteinderivater (gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og proteosepepton)
    • 1.4 Fermentering av karbohydrater (glukose, laktose og sukrose)
    • 1.5 Gassproduksjon
    • 1,6 Natriumtiosulfat og jernholdig ammoniumsulfat (produksjon av hydrogensulfid)
  • 2 Fremstilling
  • 3 bruksområder
  • 4 Seeded
  • 5 begrensninger
  • 6 Referanser

fundament

Hver av forbindelsene oppfyller en funksjon i mediet.

Natriumklorid og agar

Natriumklorid er nødvendig for å opprettholde den osmotiske likevekten i mediet. Mens agar gir den faste konsistensen.

PH-indikator (fenolrød)

PH i det fremstilte medium er balansert til 7,3 og pH-indikatoren (fenolrød) blir gul under 6,8. Dette betyr at små mengder syre produsert ved fermentering av sukker vil gjøre mediet fra rød-oransje til gult.

Hvis det ikke forekommer gjæring, vil det bli alkalisering av mediet ved bruk av peptonene, snu fra rød-oransje til sterk rød.

Proteinderivater (gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og proteosepepton)

Når bakteriene metaboliserer proteinene som er tilstede i TSI-agar, produseres aminer som alkaliserer mediet (hovedsakelig på skrånivå), fordi reaksjonen trenger oksygen. Aminene setter bekken til sterk rødt.

Men dette vil avhenge av bakteriers evne til å gjære karbohydrater eller ikke.

Fermentering av karbohydrater (glukose, laktose og sukrose)

Studien av gjæring av sukker kan gi flere bilder, og hver enkelt tolkes forskjellig. Tolkningen av testen fordeler mikroorganismer i 3 kategorier: ikke-glukose fermentorer, ikke-laktose fermentorer og laktose / sukrose fermentorer.

Det skal bemerkes at mengden glukose i mediet er begrenset, mens konsentrasjonen av laktose og sukrose er 10 ganger høyere.

Bakteriene fra Enterobacteriaceae-familien og andre glukose-fermenterende mikroorganismer vil begynne å gjære dette sukker fordi det er det enkleste karbohydratet for energi..

Dessuten, laktose og sukrose er komplekse karbohydrater som må brytes ned og omdannes til glukose for å gå inn i syklusen kan Embden-Meyerhof.

-Ikke-fermenterende glukose mikroorganismer

Når den inokulerte mikroorganismen ikke er i stand til å gjære glukose, kan mye mindre gjære andre karbohydrater. Derfor blir ikke syrer dannet her, men det er amindannelse i skråningen på grunn av bruken av peptoner.

I dette tilfellet vender skråningen til en sterkere rød og bunnen av røret kan forbli uendret eller kan også alkaliseres, og etterlater hele det røde røret.

Tolkning: K / K betyr alkalisk skråning / alkalisk eller nøytral bakgrunn

På bildet som er i begynnelsen av artikkelen, se bildet av rør D.

Dette resultatet indikerer at mikroorganismen ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien.

-Ikke-fermenterende mikroorganismer av laktose / sukrose

Hvis bakteriene er i stand til å fermentere glukose, men ikke laktose eller sukrose, vil følgende skje:

Bakterien vil forbruke all glukose tilstede etter ca. 6 til 8 timer, kunne surgjøre både skrå og taco; det vil si at agaren har blitt helt gul. Men når glukose er utarmet og manglende evne til å bruke laktose og sukrose, vil bakteriene begynne metabolismen av proteiner.

Denne reaksjonen trenger oksygen, derfor forekommer nedbrytningen av peptonene på overflaten (skråning). De fremstilte aminer alkaliserer bekken ved å snu gul til rød. Denne reaksjonen er påvist ved 18 til 24 timer inkubasjon.

Tolkning: K / A betyr alkalisk fasong og syre taco.

På bildet som er i begynnelsen av artikkelen, se bildet av rør B.

-Laktose / sukrose fermenterende mikroorganismer

Selvfølgelig kan mikroorganismer som er i stand til å fermentere laktose og sukrose, fermentere glukose. Etter at den minimale mengden av glukose som er tilstede i mediet er oppbrukt, pyruvat dannet begynner å forbrenne under dannelse av syrer ved hjelp av aerob Krebs syklus, og den periode på 8 til 12 timer alt medium er gul.

Hvis bakterien er i stand til å spalte laktose eller sukrose, er de fortsatt produsere syre, og etter 18 til 24 timer alt -bisel taco- rør og fortsette gul.

Merk at glukose utnyttelse gjøres på to måter: en i aerobt på rammen av røret, og den andre anaerobt i bunnen av røret.

Tolkning: A / A betyr sur avfalls- / syrebunn. Det kan presentere gass eller ikke.

På bildet som er i begynnelsen av artikkelen, se bildet av rør A.

Gassproduksjon

Noen mikroorganismer er i stand til å produsere gass under fermentering av sukkerarter. Gassen er vist i røret ved trykket det utøver i agaret. Trykket forårsaker dannelsen av bobler eller forskyvning av agar. Noen ganger kan gassdannelse bryte mediet.

Det er viktig at ved tidspunktet for sådd av TSI-mediet, gjøres punkteringen rent ved midten av agaren til den når bunnen. Hvis punkteringen blir avledet mot rørets vegger, kan det føre til falske positiver i produksjonen av gassen, siden den vil unnslippe gjennom feilformet kanal.

Gassproduksjonen og de reaksjoner som oppstår i rammen agar, har behov for oksygen, og derfor anbefales det at røret er koblet med bomullsplugg, og hvis bakelitt hetten er brukt, bør dette ikke være satt helt.

Gassproduksjon er rapportert som positiv (+) eller negativ (-).

Natriumtiosulfat og jernholdig ammoniumsulfat (produksjon av hydrogensulfid)

Bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass), ta svovel av natriumtiosulfat tilstede i mediet. Når H er dannet2S reagerer med jernholdig ammoniumsulfat, produserer jernsulfid (svart bunnfall klart synlig).

Produksjonen av H2S er rapportert som positiv (+) eller negativ (-).

På bildet som er i begynnelsen av artikkelen, se bildet av røret C.

forberedelse

Veid 62,5 g av dehydrerte triplesukker sukker (TSI) agar og oppløs i 1 liter destillert vann.

Varm opp til agar er helt oppløst. Kok i et øyeblikk omrøring ofte. Fordel 4 ml mediet i 13/100 reagensrør med bomullsdeksel.

Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la hvile på en skrå måte. Det må tas hensyn til at både basen og beslaget har samme avstand.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. Tillat å temperere før planting av bakteriestammen.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og det fremstilte medium er rød-oransje

Den endelige pH av det fremstilte medium er 7,3 ± 0,2.

søknader

TSI-testen er mye brukt på mikrobiologilaboratoriet. Denne testen er viktig for å veilede den type test som må brukes for å komme til identifikasjon av slekten og arten. Den gode gjennomføringen og tolkningen kan spare materiale og arbeid.

Hvis resultatet er en TSI K / K og cytokromoksydase testen er positiv, er det kjent at tester for identifisering av ikke-fermentorer, slik som Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia Gram negative bakterier, blant andre genre bør brukes. Hvis negativ oksidase er innrettet mot kjønn Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc..

Men hvis du får en TSI A / A eller K / A og cytokromoksydase testen er negativ, noe som ytterligere reduserer nitrater til nitritter, ha visshet om at det er en mikroorganisme som tilhører familien Enterobacteriaceae. I dette tilfellet vil banen identifikasjon vil være rettet mot spesifikke tester for denne gruppe av bakterier.

Videre, hvis en K / A eller A / A bilde og cytokrom oksidase testen er positiv, blir oppnådd ytterligere tester for å ri vil være rettet mot identifisering av gjærstammer som ikke tilhører familien Enterobacteriaceae, såsom Aeromonas, plesiomonas, Vibrio og Pasteur.

En TSI med hydrogensulfid, oksidase negativ, lede identifisering av de følgende slekter av familien Enterobacteriaceae Proteus, Citrobacter, Edwardisiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

Et sulfid TSI lav eller moderat hydrogen i alkaliske alkali bunnrammen og en positiv oksydaseprøve guide til bruk for identifisering av ikke-fermentativ Gram-negative staver produsenter H2S, for eksempel Shewanella putrefaciens.

Til slutt kan TSI brukes til undersøkelse av produksjon av hydrogensulfid i gram-positive baciller, spesielt når det er mistanke om Erysipelothrix rhusiopathiae.

plantet

TSI-mediumet må inokuleres med rene kolonier, isolert i primære eller selektive kulturer. Hvis kolonien er tatt fra selektive medier som ble podet med prøver med blandet flora, bør det tas hensyn til å ta bare overflaten, da det kan være levedyktige stammer i det nedre del av kolonien..

Derfor bør sløyfen aldri avkjøles i et selektivt medium for deretter å ta kolonien og inokulere et TSI-medium.

Plantingen vil bli gjort med en straight loop eller nål. En punktering vil bli gjort, pass på at den er gjennom midten av midten til å nå bunnen, og så er plantingen ferdig med å inokulere overflaten på en zigzag måte. Ikke gjør to punkteringer.

Inkuber ved 37 ° C i aerobiosi i 18-24 timer. Tolk på denne tiden, verken før eller etter.

begrensninger

TSI-testen bør leses mellom 18 til 24 timer inkubasjon. En lesing før denne tiden kan gi en falsk positiv til gjæring A / A. Mens en lesning etter denne tiden kan gi opphav til et falskt negativt bilde av ikke-fermentor, på grunn av forbruk av peptoner som alkaliserer mediet.

referanser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI-agar." Wikipedia, Den frie encyklopedi. 10. juli 2018, 08:09 UTC. 10. februar 2019, 03:33 Tilgjengelig på: en.wikipedia.org
  5. Laboratorier Britania. TSI agar (trippel sukker jern agar). 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  6. BD Laboratories Trippel sukker jern agar (TSI Agar). 2003. Tilgjengelig på: bd.com