Bright green agar foundation, forberedelse og bruk

den lys grønn agar Det er et solidt kulturmedium med høy grad av selektivitet. Det brukes utelukkende til isolasjon av stammer av slekten Salmonella, men det er noen unntak, for eksempel typhi og paratyphi arter som ikke vokser i dette mediumet.

Søket etter slekten Salmonella er hyppig i prøver av avføring, vann eller mat. I denne forstand kan dette mediet være svært nyttig. Denne agar ble opprettet i 1925 av Kristensen, Lester og Jurgens, senere modifisert av Kauffmann.

Den består av pluripeptoner fra peptisk fordøyelse av animalsk vev og bukspyttkjertel fordøyelse av kasein, inneholder også gjærekstrakt, natriumklorid, laktose, sukrose, fenolrød, lysegrønn og agar-agar.

Det er preget av å være et svært ugjestmild medium for de fleste bakterier som favoriserer veksten av Salmonella, men noen coliforms er i stand til å subsistens i det, utvikler seg svakt.

Det er viktig å fremheve at i dette mediumet vokser ikke Shigella-slekten, og heller ikke Salmonella typhimurium, eller Salmonella paratyphi. Derfor, hvis det er ønskelig å isolere disse mikroorganismer, bør andre midler brukes, blant annet XLD-agar..

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Lys grønn agar
  • 1.2 Varianter av lyse grønne agar (BGA)
• 2 Fremstilling
• 3 bruksområder / applikasjoner
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 referanser

fundament

Lys grønn agar

Hver av komponentene som utgjør mediet har en spesifikk funksjon som bestemmer egenskapene og egenskapene til agar.

De pluripeptoner og ekstrakt av gjær er kilden til næringsstoffer fra hvor mikroorganismer tar nitrogen og mineraler som er nødvendige for deres utvikling. Laktose og sukrose er energikilder for mikroorganismer som er i stand til å gjære dem.

Den lyse grønn er den hemmerende substansen som forhindrer utviklingen av Gram-positive bakterier og et stort antall gramnegative mikroorganismer.

Natriumklorid gir osmotisk stabilitet til mediet. Mens fenolrød er indikatoren for pH, blir det farge når det oppdages produksjon av syrer fra fermentering av karbohydrater.

De ikke-fermenterende koloniene av laktose og sukrose vokser i dette mediet av hvit farge, rosa eller gjennomsiktig, på rød bakgrunn. For eksempel bakterier av slekten Salmonella.

Mens laktose-fermenterende bakterier eller sukrose er i stand til å vokse i dette mediet, utvikler de grønn-gule eller grønn-gule kolonier på en gulgrønn bakgrunn. For eksempel, Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae.

Varianter av lyse grønne agar (BGA)

Det finnes andre varianter av lyse grønne agar; novobiocin green agar bright glucose (NBG) og novobiocin agar lyse grønn glycerol laktose (NBGL).

Novobiocin agar lyse grønn glukose (NBG)

Inneholder tryptikase soyagar, ferriammoniumcitrat, natriumtiosulfatpentahydrat, fenolrødt, glukose, lysegrønn, novobiocin og destillert vann.

Ser til isolering av Salmonella kolonier fra avføring prøver.

I dette tilfellet er den lyse grønne og novobiocin er hemmende stoffer som hemmer veksten av grampositive bakterier og enkelte gramnegative mikroorganismer.

Natriumtiosulfat er kilden til svovel og ferriscitrat er kilden til jern, både nødvendig for å avsløre produksjonen av hydrogensulfid gjennom dannelsen av et svart presipitat av ferrisulfid.

Glukose er gjærbar karbohydrat og fenolrød er pH-indikatoren.

I dette mediumet utvikler Salmonella-koloniene store med et svart senter omgitt av en rødlig halo og etterfulgt av et klart synlig område. Noen stammer av Citrobacter freundii produsere kolonier som er identiske med salmonella.

Lys grønn novobiocin agar glycerol laktose (NBGL)

Dette medium inneholder tryptikase soyagar, ferriammoniumsitrat, natriumtiosulfat, laktose, glyserol, lyse grønn, novobiocin og destillert vann.

Forskjellen på dette mediet med den forrige er at glukose er erstattet av laktose og glyserol og fenolrød ikke brukt.

Mediet brukes også til å isolere Salmonella-arter, koloniene utvikles svarte ved produksjon av hydrogensulfid.

Bare kolonier som ikke produserer syre fra glycerol eller laktose, oppnår en H-produksjon₂Det er nok, fordi den lave pH forstyrrer dannelsen av H₂S. Dette resulterer i fargeløse kolonier for de fleste Proteus- og Citrobacter-arter.

forberedelse

-Veie 58 gram av det kommersielt oppnådde dehydrerte mediet. Legg det i en liter dobbeltdestillert vann. Bland, la stå et par minutter og send preparatet til en varmekilde til det oppløses helt.

-Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter, ikke overstige steriliseringstiden.

-La stå og server selv varm i sterile petriskål. Den endelige pH-verdien skal være 6,9 ​​± 0,2.

-Tillat å størkne og lagre i kjøleskap til bruk. Før planting skal platene ta romtemperatur.

-Pulvermediet er grønt og klar til å ta en oransjebrun eller rød-grønn farge, avhengig av pH og det kommersielle huset. En veldig brun farge er indikativ at agaren var overopphetet.

-Når agar er størknet, anbefales det ikke å omarbeide, ettersom mediet forverres.

Bruk / applikasjoner

Dette mediet brukes til å søke etter stammer av slekten Salmonella, blant annet av avføringprøver og meieriprodukter..

Ettersom det er et ganske ugjennomtrengelig miljø, er det tilrådelig å plante et rikelig inokulum hvis den direkte prøven brukes. Ellers bør pre-anrikning og anrikning av prøvene gjøres før planting i dette mediet.

Ettersom noen av Salmonella-stammene hemmer eller vokser med vanskeligheter, er det tilrådelig å følge mediet med andre selektive agar for salmonella.

All koloni med karakteristisk Salmonella må underkastes biokjemiske tester for endelig identifikasjon.

Kvalitetskontroll

For å teste det klare grønne agarmediumets gode funksjon, kan ATCC-stammer brukes til å observere utviklingen av det samme på den..

De hyppigste stammer som brukes til kvalitetskontroll er: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

De første 3 må gi rosa eller gjennomsiktige hvite kolonier på en rød bakgrunn. Salmonella med god utvikling og Proteus med sparsom eller vanlig vekst.

Klebsiella og Escherichia forventes gulgule kolonier med gul bakgrunn, og i tilfelle Shigella og Staphylococcus bør hemmes.

Det dehydrerte mediet bør oppbevares ved romtemperatur, på et tørt sted, fordi mediet er veldig hygroskopisk.

referanser

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Brilliant Green Agar. 2009
2. British Laboratory Lys grønn agar. 2015.
3. BD Laboratory. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial