Vogel-Johnson Agar grunnlag, forberedelse og bruk



den Vogel-Johnson agar er et solidt, selektivt og differensielt kulturmedium, spesielt formulert for isolering av Staphylococcus aureus. Dette mediet ble skapt av Vogel og Johnson i 1960 fra modifikasjonen av glycin telluritt agar formulert i 1955 av Zebovitz, Evans og Niven.

Modifikasjonen besto av å øke konsentrasjonen av mannitol tilstede i mediet og i inkorporering av en pH-indikator. Den nåværende formel er sammensatt av tryptikase gjærekstrakt, mannitol, dikaliumfosfat, litiumklorid, glycin, fenolrødt, agar, kaliumtelluritt oppløsning 1% og vann.

Det skal bemerkes at det er andre midler som, som Vogel-Johnson agar, er selektive for isolering av S. aureus, slik som saltet mannitolagar og Baird Parker-agar. I denne forstand kan det sies at grunnlaget for Vogel-Johnson agar er en blanding mellom salt mannitolagar og Baird Parker-agar..

I den første koloniene av S. aureus De skiller seg ut ved å fermentere mannitol og snu pH-indikatoren til gul. På den annen side, i den andre S. aureus Den er karakterisert ved å redusere telluritt til tellur og danner grå til svarte kolonier. Begge egenskapene blir observert i Vogel-Johnson agar.

Dette mediet, som dets motstykker, er nyttig for påvisning av Staphylococcus aureus i matprøver, sanitære kontroller av industriprodukter og i kliniske prøver.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Innhold av næringsstoffer
    • 1.2 Selektiv kraft
    • 1.3 Differensiell effekt
    • 1.4 Osmotisk balanse og størkningsmiddel
  • 2 Fremstilling
    • 2,1 1% vekt / volum kalium telluritt løsning
    • 2,2 Vogel-Johnson agarbasemedium
  • 3 Bruk
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referanser

fundament

Næringsstoffs bidrag

Vogel-Johnson-mediumet inneholder triptin og gjærekstrakt; Begge stoffene gir langkjente aminosyrer som fungerer som karbon- og nitrogenkilder som er nødvendige for bakteriell vekst. Bakterier som kan vokse i dette mediet, tar næringsstoffene fra disse stoffene.

Selektiv kraft

Agar Vogel - Johnson er i stand til å hemme veksten av gram-negative bakterier og enda noen Gram-positive, å stimulere utviklingen av koagulase-positive stafylokokker. De hemmerende stoffene er kaliumtelluritt, litiumklorid og glycin.

Differensiell kraft

Stoffene som lager dette differensialmediet er mannitol og kalium telluritt. Mannitol er et karbohydrat, og når gjæret syrer som gjør det midtre sving fra rød til gul oppstår, som oppstår takket være tilstedeværelsen av pH-indikatoren fenolrød.

Mens den fargeløse telluritten når den reduseres til metallfri telluride, tar en mørkegrå til svart farge.

den Staphylococcus aureus fermenter mannitol og reduserer telluritt til tellurium. Det er derfor de typiske koloniene av S. aureus i dette mediet er de grå eller svart omgitt av et gult medium.

Bakterier vokser i dette medium og reduserer ikke tellurite eller fermentere mannitol, skjema enda mer intens enn den opprinnelige fargen transparente kolonier omgitt av en middels rød på grunn av alkalisering av mediet ved bruk av peptoner.

På den annen side vil bakterier som reduserer telluritt, men ikke gjærer mannitol, vokse som grå eller svarte kolonier omgitt av en dyp rød farge.

Hvis mediet ble fremstilt uten tilsetning av kaliumtelluritt, ble koloniene av S. aureus de ville utvikle seg som gule kolonier, omgitt av et gult medium, som i salt mannitolagar.

Osmotisk balanse og størkningsmiddel

Dik Kaliumfosfat opprettholder den osmotiske balansen i mediet og justerer pH til nøytralitet 7.2. Mens agar gir solid konsistens til dyrkningsmediet.

forberedelse

1% kalium telluritt løsning m / v

Denne løsningen er ikke inkludert i dehydratiserte medium, fordi det ikke kan steriliseres i en autoklav. Av denne grunn blir det tilberedt separat og tilsatt til det steriliserte medium.

Noen kommersielle hus selger klargjort 1% kalium telluritt løsning. Hvis du vil forberede deg på laboratoriet, fortsett som følger:

Veid 1,0 g kalium telluritt og måle 100 ml destillert vann. Oppløs kalium telluritten i en del av vann og fullfør deretter mengden vann til du når 100 ml. Steriliser løsningen ved filtreringsmetode.

Vogel-Johnson agarbasemedium

Veid 60 g av dehydratiserte medium, og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen oppvarmes til koking for å hjelpe i fullstendig oppløsning. Under oppløsningsprosessen blir mediet ofte omrørt.

Steriliser i en autoklav ved 15 pund trykk og 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la det stå til mediet når en temperatur på ca. 45 til 50 ° C. Tilsett 20 ml av den tidligere fremstilte kaliumtellurittoppløsningen til 1%.

Bland og hell i sterile petriskål. Tillat å størkne og bestille invertert i plaquers for senere oppbevaring i kjøleskapet til bruk.

Den endelige pH-verdien av det fremstilte medium bør være på 7,2 ± 0,2.

Før du planter en prøve, vent til platen tar omgivelsestemperaturen.

Fargen på det tilberedte mediet er rødt.

bruk

Selv om det kan brukes til isolering av S. aureus I alle typer prøver er det mest brukt til mikrobiologisk analyse av farmasøytiske produkter, kosmetikk og mat.

Det anbefales at inokulumet er tett. Frø kan utføres ved strikking med platina håndtak eller ved overflate med Drigalski spatel.

Platene inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiosis.

Kvalitetskontroll

For å utføre kvalitetskontrollen av Vogel-Johnson-mediumet, kan følgende kontrollstammer brukes:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det forventede resultatet er som følger: for stammer av S. aureus Tilfredsstillende vekst med svarte kolonier omgitt av gult medium. til S. epidermidis vanlig vekst med gjennomsiktige eller svarte kolonier omgitt av rødt medium.

På samme måte for E. coli Det forventes at det vil være total inhibering, og for Proteus mirabilis delvis eller total inhibering; hvis det vokser vil det gjøre så sparsomt, og koloniene blir svarte omgitt av en middels rød farge.

referanser

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel og Johnson Agar). 2006. Tilgjengelig på: bd.com
  2. Laboratorier Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  3. Laboratorier Britania. Kalium telluritt. 2015. Tilgjengelig på: britania.com
  4. Himedia Laboratory. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018. Tilgjengelig på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12. utgave, s. 502-503. Tilgjengelig i: Brukere / Team / Nedlastinger
  6. Bidragsytere til Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia til encyklopedisk livre,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Mat. Isolasjon og telling Staphylococcus aureus. Tilgjengelig i:sencamer.gob.ve