Pepton vannfunn, forberedelse og bruk

den peptonada vann det er et ikke-selektivt flytende anrikningsmedium, hovedsakelig brukt som fortynningsmiddel for matprøver eller andre materialer. Dette betyr at det kjemiske synspunktet er veldig enkelt, inneholder pepton av kjøtt, natriumklorid og vann.

Den har en bestemt næringsverdi, slik at prøven kan berikes. Hvis det er batterier, betyr dette at det er mulig å reparere levedyktigheten. Det er spesielt nyttig i utvinning av bakterier som tilhører familien Enterobacteriaceae.

Ved utvinning av salmonellas anbefales bruk av buffertpeptonada vannvarianten; Dette tjener som et middel for forhåndsanrikning av prøven, i dette tilfelle inneholder den andre elementer som dinatriumfosfat og dikaliumfosfat.

Normalt fremstilles peptonada vann i nøytral pH, men det finnes andre varianter hvor det er nødvendig at pH er 8,5 ± 0,2 (alkalisk) fordi bakteriene som skal isoleres er alkalofile, som for eksempel Vibrio cholerae.

På den annen side kan dette mediet brukes som et grunnmedium for karbohydratgæringstester.

index

• 1 Foundation
• 2 Fremstilling
  • 2.1 Hjemmeforberedelse (ikke-kommersiell)
  • 2.2 Fremstilling ved bruk av kommersielt medium
  • 2.3 Forberedelse for gjæringstester
  • 2.4 Andre varianter av peptonada vann
• 3 Bruk
  • 3.1 Krakkprøver
  • 3.2 Matprøver
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 begrensninger
• 6 Referanser

fundament

Peptoner gir næringsstoffene som kreves for bakteriell utvikling, spesielt nitrogen- og kortkjedede aminosyrer, mens natriumklorid opprettholder osmotisk balanse.

I tillegg tillater mediet at disperger, homogenisere og reparere bakterieceller som har blitt skadet av industrielle prosesser..

Som fortynningsmiddel er det ideelt, effektivt erstatter den fysiologiske løsningen (SSF) eller fosfatbufferen (PBS).

Bakteriell vekst er tydelig ved å observere turbiditeten av den.

forberedelse

Hjemmelaget forberedelse (ikke-kommersiell)

Veid 1 g pepton og 8,5 g natriumklorid, oppløs i 1 liter destillert vann. PH bør justeres til 7,0. For dette kan du bruke 1 N natriumklorid.

Fremstilling ved bruk av kommersielt medium

Veid 15 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter destillert vann. Homogeniser blandingen. Om nødvendig kokes blandingen i 1 minutt for å hjelpe total oppløsning. Server i 100 ml hetteglass eller i 10 ml rør etter behov. Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter.

Kjøl og bruk eller oppbevar i kjøleskap. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og fremstilt er lysgult.

Forberedelse for gjæringstester

Til den forrige forberedelsen - før sterilisering - bør karbohydratet legges til en endelig konsentrasjon på 1%, pluss Andrade-indikatoren (syrefuchsin) eller fenolrød (0,018 g / l). En Durham-bjelle for observasjon av gassformasjon bør plasseres på rørene.

Andre peptonada vannvarianter

-Pepton vannbuffert eller bufret

Den inneholder kasein enzymatisk hydrolysat, natriumklorid, kaliumdihydrogenfosfat og natriumhydrogenfosfatdodekahydrat. Den endelige pH er 7,0 ± 0,2.

Til opparbeidelse veier 20 g av dehydratiserte medium og oppløses i 1 liter destillert vann. La stå i 5 minutter ca. Varm i 1 minutt til helt oppløst.

Hell inn i egnede flasker etter behov. Steriliser ved bruk av autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

-Alkalisk peptonert vann

Veid 25 g av dehydratiserte medium og oppløs i 1 liter vann. Fortsett som beskrevet ovenfor. PH varierer fra 8,3 til 8,7.

bruk

Inokulumet gjøres ved å plassere prøven direkte.

Det brukes til å fortynne prøvene, spesielt når det er mistanke om at det kan være skadede bakterier. Vanligvis er fortynningene 1:10 og 1: 100.

Inkuber i 24 timer i aerobios ved 35-37 ° C.

Krakkprøver

For avføringsprøver som ser etter Salmonella, anbefales bruk av buffret eller bufret vann som et pre-anrichment medium..

For å gjøre dette, fortsett som følger:

Hvis avføringen er dannet, ta 1 g prøve. Hvis de er flytende, ta 1 ml avføring og suspender i et rør med 10 ml buffert peptonert vann. I tilfelle av rektale vattpinne, slipp ut materialet som er inneholdt i vattpinnen i røret med bufret peptonert vann.

I alle tilfeller blandes og homogeniseres prøven veldig bra.

Inkuber ved 37 ° C i 18 til 24 timer. Derefter sub-dyrkes i en anrikningsbuljong som selenittcystinbuljong eller tetrathionatbuljong ved 37 ° C i 18-24 timer. Til slutt dyrkes i selektive medier for Salmonella, slik som SS agar, XLD agar, Hektoen agar, blant andre.

Matprøver

Peptonvann brukes som et anrikningsmedium eller som et enkelt fortynningsmiddel, men hvis det søges Salmonella-arter, blir det brukt som et pre-anrikningsmedium, som allerede beskrevet..

I matvarer fortsett som følger:

For fast mat veier 25 gr av prøven og for flytende mat måler 25 ml av det. Plasser den delen i flasker som inneholder 225 ml peptonert vann. Bland og homogeniser prøven.

Hvis det er mistanke om at den mikrobielle belastningen er høy serielle fortynninger eller dekimaler kan gjøres for å lette tellingen av kolonidannende enheter (CFU).

Antall fortynninger vil avhenge av type prøve og analytisk erfaring.

Hvis det tvert imot mistenkes at den mikrobielle belastningen er svært lav, er det ikke nødvendig å gjøre fortynninger. Deretter subcultivate i selektive medier.

I tilfelle av mat fra havet, som sjømat, fisk, blant annet på jakt etter Vibrio cholerae eller andre Vibrio-arter, bør peptonvann justert til pH 8,5 (alkalisk peptonert vann) brukes.

Kvalitetskontroll

Fra hver sats forberedt, bør ett til to rør inkuberes uten inokulering i 24 timer i aerobios ved 37 ° C. På slutten av tiden bør ingen turbiditet eller fargeendring observeres.

Også, velkjente kontrollstammer kan brukes til å evaluere deres effektivitet:

For dette kan følgende bakteriestammer brukes: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

I alle tilfeller forventes en tilfredsstillende mikrobiell utvikling, som observeres av mediumets turbiditet.

begrensninger

-Det dehydrerte mediet er veldig hygroskopisk, så det bør holdes vekk fra fuktighet.

-Mediet bør ikke brukes dersom noen form for forringelse observeres.

-Det dehydrerte dyrkningsmediet bør lagres mellom 10 og 35 ° C

-Det tilberedte mediet bør holdes kjølt (2-8 ° C).

referanser

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. Teknikker for mikrobiologisk analyse av matvarer. 2009, 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico. Versjon for Administrator av Håndbøker og Dokumenter (AMyD) fra Det fakultet for kjemi, UNAM 1. Tilgjengelig på: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratorier Britania. Buffered peptonada vann. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Pepton vann. Tilgjengelig på: foodafety.neogen.com
4. Laboratorier Britania. Pepton vann. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. Merck Laboratories Bufferert pepton vann. Tilgjengelig på: merckmillipore.com
6. Laboratorier Conda Pronadisa. Alkalisk peptonert vann. Tilgjengelig på: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.