Kinyoun fargestifting og teknikker



den Kinyoun-farging Det er en fargesteknikk som brukes til å flekke syrefaste bakterier og syreparasitter. Det ble født av modifiseringen av fargen av Ziehl-Neelsen; Begge teknikkene tolkes på samme måte, men de adskiller seg i to elementer: Ved utarbeidelse av hovedreagenset, og at Kinyoun-teknikken ikke bruker varme.

Av denne grunn er det også kjent som kaldmodifisert Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kaldt flekker. Det er angitt for farging av Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypiske mykobakterier, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris og Cyclosporas cayetanensis.

Det er verdt å nevne at nocardiaene er svake med denne teknikken siden de er delvis syrefast bestanddel, så for denne sjangeren er det en modifisering av metodikken.

I sin tur ble Kinyoun-kaldteknikken kombinert med trichrometeknikken modifisert av Didier for påvisning av coccidia (Cryptosporidium parvum og Isospora belli) og spor av mikrosporidia (Enterocytozoon bieneusi og Encephalitozoon intestinalis).

index

  • 1 Foundation
  • 2 Teknikk
    • 2.1 Materialer
    • 2.2 Fremstilling av Kinyoun-fenikert fuchsin
    • 2.3 Fremstilling av alkohol-syre
    • 2.4 Fremstilling av metylenblått kontrastfarve
    • 2,5 Kinyoun-flekkteknikk
    • 2.6 Spesiell Kinyoun teknikk for Nocardias
    • 2.7 Kombinert teknikk av fenol og trichromic fuchsin modifisert av Didier
    • 2.8 Kvalitetskontroll
  • 3 Kinyoun teknikk sammenlignet med Ziehl teknikken -Neelsen
  • 4 referanse

fundament

Den primære reagens er den carbolfuchsin flekker eller fuchsin, som har den egenskap å binde til eksisterende carbolic syrer inne i celleveggen voksaktige lipidrik (mykolsyrer) av mykobakterier og visse parasitter.

Den fagforeningen er ikke motvirket av syreavfarging; Derfor er mikroorganismer definert som syrebestandig alkohol.

I motsetning til Ziehl-Neelsen teknikk som fikserer fargestoffet gjennom varme, i teknikken Kinyoun dette trinnet ikke er nødvendig, siden løsningen fuchsin forbereder for denne teknikk inneholder høy konsentrasjon av fenol.

Fenol løser lipidmaterialet i celleveggen, som tillater innføring av carbol fuchsin fargestoff. Etter at fargen penetrerer, forblir den fast til tross for vasking med alkohol-syre.

På denne måten tar de syrefaste mikroorganismer den karakteristiske røde fargen, mens alt som ikke er syrefast aluminium blir misfarget og farget blå..

teknikk

materialer

- Modifisert fenol fuchsin.

- alkohol -acetic.

- Methylenblå.

Fremstilling av Kinyoun-fenikert fuchsin

- Grunnleggende fuchsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destillert vann: 100 ml.

Den grunnleggende fuchsinen i alkohol må oppløses sakte, blandes konstant. Deretter smelter den krystalliserte fenol i et vannbad ved 56 ° C. Når det er oppløst, tilsatt 8 ml til fuchsinoppløsningen fremstilt ovenfor.

Fremstilling av alkohol-syre

- Konsentrert saltsyre: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Det må måles, sammenføyes og blandes.

Fremstilling av metylenblått kontrastfarve

- Methylenblå: 0,3 g.

- Destillert vann: 100 ml.

Den veies og oppløses.

Kinyoun-flekkteknikk

1- fremstille en smøre prøve direkte, noe som kan være sputum, lungefluid, urinsediment, cerebrospinalvæske eller faeces, blant andre; eller fra en suspensjon av mikroorganismer oppnådd fra rene kolonier utviklet i primærkulturmedier.

2- Fest smøret med varme.

3- Plasser smøret på fargebroen og dekk med Kinyouns fenoliske fuchsinreagens tilberedt. La det sitte i 3 eller 5 minutter.

4- Vask med destillert vann.

5- Blek med syrealkohol i 3 minutter og vask igjen med destillert vann.

6- Blekk igjen med syrealkohol i 1 eller 2 minutter til det ikke dras mer fargestoff.

7- Vask med destillert vann og la avløp, plasser lysbildet i oppreist stilling.

8- Dekk preparatet med metylenblått og la det stå i 4 minutter.

9 - Vask med destillert vann og la luften tørke.

10- Undersøk ved 40X og deretter ved 100X.

Hvis man vil ha forbedrede og fart farging syre alkohol resistente mikroorganismer, blir en dråpe av et fuktemiddel (såsom Tergitol No. 7) et 30 eller 40 ml fuchsin Kinyoun.

Noen laboratorier forandrer metylenblått kontrastfarve for lysegrønne eller pikrinsyre; den første gir en grønn farge til bakgrunnen og den andre genererer en gul farge.

Kinyoun teknikk spesielt for Nocardias

For å forbedre fargingen av Nocardia-bakterier, brukes en modifikasjon av Kinyoun-farging. Teknikken er som følger:

1- Dekke smeten med Kinyoun fenikert fuchsin i 3 minutter.

2- Vask med destillert vann.

3- Blekblekt med 3% tilberedt syrealkohol til det ikke dannes mer fargestoff.

4- Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk preparatet med metylenblått og la det stå i 30 sekunder.

6- Vask med destillert vann og la luften tørke.

Kombinert teknikk av fenol og trichromic fuchsin modifisert av Didier

Denne teknikken anbefales for analyse av avføring prøver på jakt etter coccidia og sporer av Microsporidium sp på samme tid Prosedyren som skal følges er som følger:

1- Dekke smeten med Kinyoun fenol fuchsin i 10 minutter.

2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

3- Blek i 30 sekunder med alkohol saltsyre.

4- Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk smøret med trichrom-oppløsning i 30 minutter ved 37 ° C.

6- Vask med destillert vann.

7- Dekoloriser i 10 sekunder med alkohol eddiksyre.

8- Vask smøret i 30 sekunder ved bruk av 95% etanol.

Kvalitetskontroll

Som en positiv kontroll blir smørene tilberedt med stammer av Mycobacterium tuberculosis og farget med de fremstilte reagensene for å verifisere at bakteriene tar den riktige farge (rødfuksi).

Negative kontroller kan også brukes ved å forberede smører med hvilken som helst stamme som ikke er syrebestandig alkohol, og dermed verifisere at hele prøven tar fargen på kontrast.

Kinyoun-teknikk sammenlignet med Ziehl-teknikken -Neelsen

Kinyoun teknikk er enklere, siden det eliminerer trinnet med oppvarming, men den viktigste fordelen er at man unngår utslipp av damp, svært giftige og forårsaker langvarig kreft. Derfor er Kinyoun-farging sikrere for fargepersonell.

Det er viktig å ta hensyn til at det er nødvendig å ta vare på at reagensene ikke kommer i direkte kontakt med huden, siden de er etsende og bleken er brannfarlig.

Med hensyn til ulempene indikerer et negativt smør ikke nødvendigvis at mikroorganismen ikke er tilstede. I tillegg kan tilstedeværelsen av celledetritus forårsake falske positiver, noe som genererer forvirring i diagnosen.

referanse

  1. Anvendt klinisk kjemi (2016). BK Kinyoun Kit. Tilgjengelig på: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun flekker og to kakcidier i HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Wikipedia bidragsytere. "Kinyoun flekken." Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, Free Encyclopedia, 8. februar 2018. Web. 5. januar 2019.
  6. Combol A Fernandez N, Figueredo E, cradling Zanetta E. Innføring av et farveteknikk for samtidig påvisning av Coccidia og mikrosporidier. Hygiene Institute of Republic of Republic. Montevideo. Uruguay. Tilgjengelig på: higiene.edu.uy