Stain by May Grünwald-Giemsa grunnlag, teknikk og bruk



den Mai Grünwald-Giemsa flekker o Pappenheim er en differensiell fargesteknikk som blander Giemsa og May Grünwald reagensene. Det brukes til differensiering av normale og unormale blodceller i utstryk av perifert blod og benmarg, samt for farging av histologiske seksjoner og cytologiske prøver.

Begge reagensene - Gemsa og May Grünwald - er avledet fra Romanowsky-type farging, en teknikk basert på kombinasjonen av syre og basiske fargestoffer.

Giemsa forbedret teknikken ved å stabilisere blandingen av eosin, metylenblå og dets derivater, med glyserol. I motsetning kan May Grünwald bruke eosin og metylenblå ved å bruke metanol som løsningsmiddel. Denne strategiske kombinasjonen har gitt gode resultater.

Mens i form av cellemorfologi observasjon virker på samme måte Giemsa og Wright, forbedrer denne teknikken ovenfor avstemningsfarve parasitter som forårsaker malaria, Chagas, leishmaniasis og trichomoniasis.

I tillegg har det vist seg å være en meget nyttig teknikk for den cytologiske studien av sædvæske. Det har vært fremhevet, ikke bare ved å vise de morfologiske egenskapene til sæd, men også meget effektivt skiller leukocytter, epitelceller og spermatogenesen.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Variety av fargestoffer
  • 2 Teknikk
    • 2.1 Materialer
    • 2.2 Konsentrert fargeløsning Mai Grünwald
    • 2.3 Konsentrert Giemsa fargestoff
    • 2.4 Fremstilling av bufferløsningen ved pH 7,2
    • 2.5 Blodspredning eller beinmargfargingsprosedyre
    • 2.6 Utvidet fargesteknikk av sædvæske
    • 2.7 Viktige spesifikasjoner
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Vaginal cytologi
    • 3.2 Spermeprøve
  • 4 referanser

fundament

Teknikken følger grunnlaget for Romanowskys flekker, hvor syrefarger har selektiv affinitet for de cellulære basiske komponentene, og de sure komponenter tiltrekker de grunnleggende fargestoffer.

Forklares på en annen måte, har begge cellestrukturer og fargestoffer positive eller negative elektriske ladninger; like kostnader avviser og ulike kostnader blir tiltrukket.

For eksempel er basiske fargestoffer som metylenblått positivt ladet og tiltrukket av negativt ladede strukturer. Derfor er dette fargestoffet kjerner som er rike på DNA og RNA som har negativt ladede fosfatgrupper.

Granulene av de segmenterte basofilene og cytoplasmaene av de mononukleære hvite blodceller som inneholder RNA, farves også.

På samme måte bærer syrefargen en negativ ladning, og det er derfor det forbinder positivt ladede strukturer som erytrocyter og granulene i segmenterte eosinofiler. Når det gjelder granulene i de segmenterte neutrofiler, fikserer disse begge farger.

En rekke fargestoffer

I denne teknikken sameksisterer en kombinasjon av reaksjoner mellom ortokromatiske farger og metakromatikk. Ortokromatikk (eosin og metylenblå) binder til cellestrukturen som de er relaterte til og gir en stabil farge som ikke varierer.

På den annen side varierer metakromatikk (derivatene av metylenblått azur A og azurblå B), deres originale farge når de er bundet til den spesifikke strukturen, og det kan til og med være en rekke nyanser.

Endelig krever trinnet fra May Grünwald-løsningen tilstedeværelsen av vann, fordi uten det vil fargestoffet trenge inn i konstruksjonene, men vil ikke bli løst. For dette skal fargestoffet bli polært eller ionisert, og dermed være i stand til å utfelle og feste til relaterte strukturer.

teknikk

materialer

- Lysbilder for lysbilder.

- Fargebroer.

- Løsning av May-Grünwald.

- Giemsa flekk.

- Destillert vann.

Konsentrert fargeløsning Mai Grünwald

Vi må veie 0,25 g eosin-metylenblå (fargestoff ifølge May Grünwald) og oppløses i 100 ml metanol. Blandingen blandes deretter i 1 time og lar seg hvile i 24 timer. Ferdig tid, det filtrerer.

For å bruke teknikken til å være fortynnet fargestoff mai Grünwald følger: for 200 ml fortynnet fargestoff 30 ml av den konsentrerte oppløsningen måles, 20 ml bufferoppløsning tilsettes og 150 ml destillert vann justert til pH7.2-7.3 . Det blandes deretter og filtreres.

Konsentrert Giemsa fargestoff

Vekt 0,5 g azur-eosin-metylenblå (fargestoff ifølge Giemsa), oppløs i 50 ml metanol og plasser 50 ml glyserin i blandingen.

For å utføre teknikken, fortynn 1:10 med bufferløsning og la den hvile i 10 minutter. Det kan filtreres om nødvendig.

Fremstilling av bufferløsningen ved pH 7,2

De må veies:

- 40 mg kaliumdihydrogenfosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumhydrogenfosfat 12-hydrat (Na2HPO4).

Begge forbindelsene oppløses i 100 ml vann.

Blodspredning eller beinmargfargingsprosedyre

Det er to modaliteter: en klassiker og en rask en.

Klassisk modus

  1. Dekk smørene i 2 eller 3 minutter med fortynnet May-Grünwald-løsning.
  2. Vask med buffert destillert vann for å eliminere den forrige løsningen.
  3. Dekk med samme bufferte vaskeløsning og la det stå i 1 minutt. Tanken er at forrige fargestoff er festet til strukturen, og at cellene samtidig er hydrert.
  4. Tilsett 12 dråper fortynnet Giemsa-tinktur på det buffede vannet og blås for å blande og homogenisere. La stå i 15 eller 20 minutter.
  5. Vask smørene med buffert destillert vann og plasser det for å lufttørke.
  6. Fokusere og observere i et optisk mikroskop fargede blodcellene ved hjelp av 40X-objektivet. Om nødvendig kan 100X brukes.

Hurtigmodus

  1. Dekk smeten med May Grünwald fargestoff fortynnet i 1 minutt.
  2. Vask med buffert destillert vann.
  3. Dekk med buffert vann og la stå i 1 minutt.
  4. Legg det fortynnede Giemsa-fargestoffet og la det stå i 5 minutter.
  5. Vask med buffert destillert vann og la det lufttørke.

Teknologiene beskrevet her er en veiledende guide, men det må tas hensyn til at prosedyrene og fargetidene varierer i henhold til det kommersielle huset som leverer reagensene. Det anbefales at du følger trinnene som er stilt indirekte av hvert kommersielt hus.

Sperm væske forlenget fargingsteknikk

1- Dekk spredningen med et tynt lag av May Grünwald-oppløsning i 4 minutter.

2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

3- Legg et lag med fortynnet Giemsa (1:10) i destillert vann i 15 minutter.

4- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

5- La tørke og observere under mikroskopet.

Viktige spesifikasjoner

Teknikken krever reagenser og vaskeoppløsninger har en pH justert til 7,2 -7,3 slikt at farvestoffet affinitetene til cellestrukturene ikke er forvrengt og varierer ikke den endelige fargen forventede.

søknader

Denne teknikken brukes av kliniske laboratorier til å plette utstrykninger av perifert blod og benmarg, vevseksjoner og cytologier.

I det hematologiske feltet er denne teknikken av vital betydning i studien av abnormiteter av celler i form, størrelse og antall. Det er et svært verdifullt verktøy for diagnostisering av visse sykdommer, for eksempel leukemi og anemi.

I tillegg presenterer den et fremragende verktøy når man ser etter parasitter i de hematologiske feltene (Plasmodium sp og Trypanosoma cruzi) eller histologisk (Leishmanias sp).

Vaginal cytologi

Når det gjelder vaginal cytologi, er denne teknikken spesielt fordelaktig for observasjon av Trichomonas vaginalis. Dette er et viktig funn, siden dets tilstedeværelse simulerer karsinombilder in situ som da forsvinner når parasitten elimineres.

Spermieprøve

Det har vært et ideelt verktøy for studiet av sædprøver, siden det gir verdifull informasjon om spermatets kvalitet.

De presenterte data er i hovedsak nummer og morfologi, og også samtidig celler som kan være til stede og som er avgjørende, som kjønnsceller, leukocytter og epitelceller.

Med denne analysen er det mulig å beskrive abnormiteter observert i sæd i hodet, nakken, midtstykket og hovedstykket.

I tillegg kan de også hjelpe Vis tilfeller haemospermia (tilstedeværelse av røde blodceller i sæd) og leucospermia eller piospermia (økt antall leukocytter i sæd).

referanser

  1. Costamagna S, Prado M. Validering av den friske testen, May Grünwald-Giemsa og Gram-farger og kulturmedier for diagnose av Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Tilgjengelig i: scielo.
  2. Merck KGaA laboratorium. Kan Grünwald eosin metylenblå for mikroskopi.
  3. "May-Grünwald-Giemsa flekken." Wikipedia, Den frie encyklopedi. 15. november 2018, 14:37 UTC. 8 jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratory Glass Chemicals Panreac. Reagenser for histologiske teknikker, hematologi og mikrobiologi. Tilgjengelig på: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Anbefaling for farging av blodutsprøytninger for å lese blodtallet. Nasjonalt og referansebiomedisinsk laboratorium. Institutt for folkehelse i Chile.
  6. Sarabia L. Spermiogram i henhold til WHO kriterier. Program for anatomi og biologi av utvikling. Fakultet for medisin Universitetet i Chile Tilgjengelig på: pp.centramerica.com