Negativ fargestifting, teknikk, fordeler og ulemper

den negativ farging Det er en spesiell fargemetode for å markere tilstedeværelsen av kapselen i enkelte mikroorganismer - hovedsakelig Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae og Cryptococcus neoformans-, fra kliniske prøver eller rene kulturer.

Den direkte prøve som vanligvis brukes til å påføre negativ farging, er cerebrospinalvæsken. Denne teknikken representerer et raskt alternativ for den presumptive diagnosen av meningitt, spesielt Cryptococcus neoformans.

I tillegg kan denne flekken brukes på sputum og sterile væsker i sin alminnelighet, samt stammer oppnådd på unge rene kulturer. Denne teknikken bruker nigrosin eller kinesisk blekk til dens utførelse; Derfor er det en veldig enkel og økonomisk metode for å søke som gir informasjon om stor diagnostisk verdi på kort tid.

I denne forstand kan ethvert laboratorium utføre denne fargen. Selvfølgelig må laboratoriet ha et kompetent personale som er i stand til å gjenkjenne gjærene til Cryptococcus neoformans isolert eller spirende og skille dem fra leukocytter og artefakter som prøven kan presentere.

index

• 1 Foundation
• 2 Teknikk
  • 2.1 Materialer
  • 2.2 Spesifikasjoner for prøvetaking
  • 2.3 Gjennomføring av teknikken med direkte prøver
  • 2.4 Gjennomføring av teknikken med stammer fra kultur
  • 2.5 Observasjon i et mikroskop
• 3 fordeler
• 4 Ulempe
• 5 Vevfarging med indisk blekk
• 6 Referanser

fundament

Nigrosin og indisk blekk virker på en lignende måte; Derfor kan en av de to stoffene brukes om hverandre.

Denne teknikken kalles negativ farging fordi den virker i strid med resten av fargingsteknikkene. I dette gjenstår ubestemt strukturen som blir søkt eller at du vil se; det vil si mikroorganismer.

Derfor er fargestoffet basert på farging av smørebunnen i en mørk farge. I dette scenariet vil de avkortede strukturene bli fremhevet i lys eller fargeløs farge.

Generelt er gjærene observert refringent, omgitt av en klar halo som tilsvarer kapsel. Dette er fordi blekket og nigrosin er ute av stand til å trenge inn i polysakkaridet stoffene som danner kapselen levende mikroorganismer.

Verdt å merke seg at enten trenge inn i andre strukturer som kan være tilstede i prøven direkte, eller erytrocytter som leukocytter.

Nå, hvis mikroorganismer er døde, kan tinkturen trenge inn i dem på en slik måte at denne fargingen også er nyttig for å evaluere mikroorganismers levedyktighet.

teknikk

materialer

nigrosin

Nigrosinen skylder navnet til den svarte fargen den har. Det er en syntetisk substans som ble oppnådd ved oppvarming av blandingen av-slike organiske forbindelser så som nitrobenzen, anilin og anilin hydrochlorite av å anvende en katalysator i reaksjons (jern eller kopper).

Kinesisk blekk

Kinesisk blekk er et stoff som hovedsakelig brukes av asiater for å skrive, lage kunstverk og monokromatisk maleri. Det er veldig populært i kinesisk kultur.

Det er hentet fra blekksprut blekk blandet med pulverisert kull, produkt av brenning av lite harpiksholdige trær.

Det er også mulig å forberede det fra sot av forbrenning av hydrokarboner (vegetabilske oljer) sammen med en proteingelatin som gir den den rette konsistensen for å forhindre utfelling av karbonpartikler.

Spesifikasjoner for prøvetaking

- Krever ikke fasting.

- CSF-prøve, sputum eller steril væske skal inneholde minst 1 ml volum og bør overføres til laboratoriet romtemperatur ble umiddelbart.

- CSF og sterile væskeprøver bør tas av en spesialist.

- Det kan også være en ren kultur av en mistenkt stamme knyttet til de nevnte patogener.

Utførelse av teknikken med direkte prøver

- Prøverne skal sentrifugeres, deretter blir supernatanten kassert og sedimentet tatt.

- En dråpe av sentrifugert materiale (sediment) og en dråpe med kinesisk blekk eller nigrosin plasseres på et rent lysbilde..

- Den skal blandes godt og dekkes med et deksel, slik at dråpen kan spre seg ut som en tynn film uten å overskride kantene.

- Deretter monteres preparatet i mikroskopet.

- Hvis preparatet er for mørkt, kan det fortynnes med vann.

Utførelse av teknikken med stammer fra kultur

- En meget liten del av en ung avling tas med en såpnål og oppløses i en dråpe med kinesisk blekk som tidligere er plassert på et rent lysbilde.

- Et deksel er plassert på toppen.

- Det observeres i mikroskopet ved 10X og deretter ved 40X.

Du kan også oppløse en del av kolonien i destillert vann, og derfra ta en dråpe og bland den med blekk. På denne måten vil preparatet ikke være så tykt, noe som gjør det mulig å observere strukturene i isolasjon; Hvis det er byområder, vil det ikke bli observert godt.

En annen metodikk er følgende:

- Legg en dråpe av kulturen i suspensjon i den ene enden av lysbildet.

- Sett en dråpe nigrosin i samme ende og bland.

- Ved hjelp av et annet lysbilde, utvide prøven som om du gjorde et hematologisk smør.

- La det tørke og observere under mikroskopet.

Observasjon i et mikroskop

Først må du fokusere med 10X objektiv for å få et bredt syn på feltet. Deretter bør du søke om det er klare mellomrom; hvis det er, fokus med 40X for å se detaljene.

nytte

- Det er enkelt å utføre.

- Det er en økonomisk teknikk.

- Denne metoden krever ikke at smøret festes til varme eller kjemikalier; Derfor observeres mikroorganismer uten forvrengninger.

- Det friske preparatet trenger ikke å tørkes, så det kan observeres umiddelbart, og gir resultater raskt.

ulempe

Når de er ferdigmontert, bør de friske preparatene observeres umiddelbart. Hvis de får lov til å tørke, er det ikke lenger mulig å observere dem og en ny.

Vevfarging med indisk blekk

En annen funksjon som kinesisk blekk kan oppfylle er i patologilaboratoriene. Dette blir brukt på vevsprøver fjernet kirurgisk for å markere margene av tumorreseksjon.

Det merkede vevet sprøytes med eddiksyre. Dette fungerer som et beisemiddel, og forhindrer lekkasje av blekk når stoffet utsettes for behandlingsrutine for fremstilling av biopsi.

Prosedyren består i å bade vevet i alkohol og xylen, og deretter binde seg i paraffinvoks. Denne markeringen styrer patologen når han observerer vevet, og indikerer hvor margenen for kirurgisk reseksjon eller et annet interessepunkt er.

referanser

1. "Nigrosine". Wikipedia, Den frie encyklopedi. 11. juli 2017, 22:46 UTC. 6 jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kinesisk blekk". Wikipedia, Den frie encyklopedi. 1. oktober 2018, 03:08 UTC. 6 jan 2019, 18:20: no.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernandez N, God C, Torres J, M Rico, J Macias et al. (2006). Arbeidspersonell i det autonome samfunnet i Extremadura. Spesifikk dagsorden Volum IV. Redaksjonell MAD. Sevilla-Spania, s. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Spesialist laboratorie tekniker, av den galiciske helsetjenesten (SERGAS). Emne spesifikk volum 2. Redaksjonell MAD. Sevilla-Spania, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Editorial